Caracterización computacional e inmunoquímica de alergenos de soja de reactividad cruzada con leche bovina

CANDREVA ANGELA; CURCIARELLO RENATA; PARISI GUSTAVO; PETRUCCELLI SILVANA; DOCENA GUILLERMO

Mar del Plata

Congreso; LVII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y LX REUNIÓN ANUAL de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2012

SA y y SAIC

La alergia a la leche de vaca (LV) constituye la principal alergia alimentaria en niños en Argentina y en otras regiones. Las fórmulas a base de soja usualmente empleadas como sustituto lácteo. Sin embargo, se ha descripto que aproximadamente el 40% de los pacientes presentan una intolerancia al inicio del tratamiento, lo cual sólo puede ser explicado por una reactividad cruzada (RC) entre ambos sistemas proteicosNuestro grupo ha identificado 3 alergenos de RC en la soja (A5A4B3, α-conglicinina y su porción carboxilo terminal (α-CTD); y P34 o alergeno mayor) que cruzan con las caseínas bovinas (alergeno mayor de la LV). Es importante destacar que los servidores actualmente disponibles en Internet que predicen RV no describen como tal a los sistemas leche/soja. Nuestro objetivo fue evaluar las características secuenciales y estructurales de los alergenos de soja estudiados, y desarrollar un modelo o estrategia computacional para predecir epitopes de RC con proteínas de LV. Para el análisis de epirtopes de RC se obtuvieron los péptidos de las caseínas bovinas descriptas como alergénicas en las bases de datos http://www.immuneepitope.org/Se los alineó con las secuencias correspondientes a P34 y α-CTD de soja, y se desarrolló un gráfico integrado basado en la acumulación de aminoácidos consenso. Para la confirmación experimental de los resultados obtenidos por este cálculo se llevó a cabo el mapeo de epitopes lineales de P34 y α-CTD, a partir del análisis de la reactividad de péptidos solapados de 15 aminoácidos (con un solapamiento de cinco residuos) sintetizados sobre una membrana de nitrocelulosa. Los spots se revelaroncon los siguientes anticuerpos: pooles de sueros de pacientes con alergia a la soja (IgE), pooles de sueros de pacientes alérgicos a LV (IgE), anticuerpos monoclonales obtenidos en ratón específicos de α-caseína (1D5), ß-caseína (4C3) y κ-caseína (3B5). La aplicación de las herramientas computacionales nos permitió predecir 2 epitopes de RC entre P34 y caseínas bovinas ( que se encuentran en la superficie de la molécula) y 2 epitopes de RC entre α-CTD y las caseínas bovinas. Estos resultados se confirmaron experimentalmente por mapeo de epitopes con péptidos solapados. En conclusión, mapeamos los epitopes de reactividad cruzada tanto de P34 como de α-CTD, lo que sería una información útil para el diseño de una vacuna destinada a producir tolerancia oral en pacientes alérgicos a la leche de vaca.