ALCANCES DE SDS-PAGE Y BLOTTING EN LA DETECCIÓN DE ALERGENOS

CELLERINO KARINA; BINAGHI MARIA; CAGNASSO CAROLINA; MAMBRíN M; DOCENA GUILLERMO H.; POLENTA GUSTAVO; VALENCIA MIRTA; LóPEZ LAURA

Congreso; XIII Congreso CYTAL - AATA; 2011

Introduccion: Debido a la incorporacion del articulo 235 septimo al Codigo Alimentario Argentino sobre la rotulacion de alergenos en alimentos, resulta necesario contar con metodologia para la deteccion de las proteinas alergenicas comprendidas en dicho articulo. Objetivos: Evaluar los alcances de una metodologia electroforetica y dos metodos inmunoquimicos para la deteccion de proteinas lacteas en sistemas modelo y en productos carnicos comerciales. Materiales y Metodos: Se analizaron nueve sistemas modelo de mezclas de carne vacuna con agregado desde 0 hasta 5000 ppm de leche en polvo descremada y diez productos carnicos comerciales. Se realizo la extraccion de proteinas totales con buffer Tris-ClH con dodecilsulfato de sodio y 2-mercaptoetanol y de proteinas solubles en isopropanol 55o+2-ME (ISO55o+2-ME). Los extractos proteicos fueron analizados por SDS-PAGE, dot blot e inmunoblotting utilizando un suero policlonal especifico de proteinas de leche bovina. Resultados y discusion: En los sistemas modelo se observo que mediante SDS-PAGE el solvente ISO55o+2- ME permite detectar la presencia de proteinas de leche a partir de 1000 ppm, mientras que no se detectan con solucion extractiva de proteinas totales (SEPT) ni siquiera en la mayor concentracion evaluada. Cuando se analizan por inmunoblotting se observa que resulta mas eficiente la extraccion de proteinas totales ya que con este solvente se ven claramente dos bandas de caseinas, a partir de 1000 ppm. El Dot blot resulta mas sensible ya que con la extraccion de proteinas totales se detecta leche a partir de 100 ppm. En muestras comerciales SDS-PAGE permitio la deteccion de proteinas lacteas en 6 muestras, dos de ellas no declaraban materias primas lacteas en su composicion. Utilizando SEPT se detecto por dot blot la presencia de proteinas lacteas en las 10 muestras analizadas, seis de ellas no declaraban proteinas lacteas en su composicion. El inmunoblotting de estos extractos permitio detectar proteinas lacteas en cuatro de estas muestras. Con ISO55o+2-ME se obtuvieron resultados similares. La diferencia en los resultados entre Dot blot e inmunoblotting podria deberse a que en este ultimo, la cantidad de proteina presente en cada banda no es suficiente para ser revelada, en cambio en los dots al haber una mayor concentracion proteica estas pueden ser detectadas. Conclusiones: Para la deteccion de proteinas lacteas presentes en baja concentracion en un producto carnico se puede utilizar Dot blot de proteinas totales como metodo de screening. El inmunoblotting de proteinas totales permite determinar si son caseinas o âlactoglobulina, aunque en algunos casos, por la baja cantidad de proteina el inmunoblotting resulta negativo. No seria de utilidad hacer Dot blot e inmunoblotting con ISO55o+2-ME ya que estos analisis resultaron positivos en los casos que tambien habian resultado positivos con SEPT. Cuando el Dot blot de proteinas totales da negativo se deberia confirmar con un metodo mas sensible (ELISA) para asegurar la ausencia de alergenos de leche por encima del limite de deteccion del metodo.