ACTIVACIÓN DE LA VÍA DE LAS MAPK EN ENFERMEDADES INFLAMATORIAS INTESTINALES Y EFECTO DE DISTINTAS DROGAS EN SU MODULACIÓN

DOCENA GUILLERMO H.; ROVEDATTI LAURA; LEAKEY NICHOLAS; MACDONALD THOMAS

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología y Grupo Rioplatense de citometría de flujo; 2008

La enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa (IBD) son enfermedades crónicas del tracto gastrointestinal debidas a una inflamación persistente originada por una respuesta exacerbada de linfocitos T mucosales. El objetivo de este trabajo fue evaluar la activación de la vía p38 y modular su fosforilación ex vivo mediante el empleo de distintas drogas (GSK). Se estudiaron biopsias colónicas (18 normales y 19 de pacientes con IBD, 12 colitis ulcerosa y 7 Crohn), piezas quirúrgicas de colon (4 normales y 3 Crohn) y PBMC. Se analizó por immunoblotting (p38, JUNK, ATF-2) y ELISA (IL-1β, IFN-g, TNF-a, IL-8, IL-12 e IL-10) el estado de activación de las MAPK y la secreción de citoquinas pro-inflamatorias. Se emplearon como activadores de las MAPK: LPS, TNF-a y a-CD3/a-CD28 y como inhibidores, 4 drogas que inhiben selectivamente p38a. Se encontró que p38 y JNK están activadas en muestras de IBD y que las distintas drogas inhiben la fosforilación de p38, JNK y ATF-2. Asimismo se observó un marcado incremento en la secreción de IL-1 β (50-300 pg/ml) y TNF-a (40-500 pg/ml) en muestras de pacientes con IBD. El efecto de las drogas inhibitorias sobre la activación de p38 y secreción de citoquinas se observó en cultivos de las biopsias y de las células mononucleares aisladas de las piezas quirúrgicas. De las 4 drogas una ejerce un marcado efecto inhibitorio (GW 856553) observándose un efecto dosis-respuesta (0.1 µM-10 µM). Se trataron las muestras y los blottings con fosfatasa alcalina y se empleó un péptido bloqueante para estudiar la especificidad de los Ac contra los componentes fosforilados. Por lo tanto en pacientes con IBD las vía de p38 y SAPK/JNK están activadas y las células mononucleares secretan cantidades anormalmente elevadas de IL-1 β y TNF-a. El empleo de 4 drogas específicas de p38a previene la activación de p38 y JNK, y la secreción de citoquinas pro-inflamatorias, en particular una de ellas, que podría ser empleada en el tratamiento de pacientes con IBD.