INVESTIGADORES
DOCENA Guillermo Horacio
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis de poblaciones celulares linfoides y mieloides en mucosa de intestino delgado humano
Autor/es:
MEIER D; CAGNOLA H; FAUDA M; RUF A; GONZALEZ CAMAPANA A; DOCENA GUILLERMO H.; CHIRDO FERNANDO; RUMBO M; GONDOLESI G
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología y Grupo Rioplatense de citometría de flujo; 2008
Resumen:
El
intestino delgado se caracteriza por la presencia de tejido linfoide
organizado con funciones inductoras de respuesta inmune: Placas de
Peyer y folículos linfoides aislados. Por otra parte, en la lámina
propria existen distintas poblaciones leucocitarias con capacidad de
inducción de respuesta inmune, funciones efectoras y regulatorias. Gran
parte del conocimiento ha sido generado en ratón, siendo muy escasa la
información disponible de intestino delgado humano.
El
objetivo de este trabajo fue optimizar la metodología de análisis de
poblaciones celulares leucocitarias de mucosa intestinal humana.
Se
estudiaron piezas quirúrgicas removidas de distintas porciones de
intestino delgado (n total= 27, duodeno n= 5, yeyuno n=7, ileon distal
n=15) provenientes de 12 pacientes pediátricos y 10 adultos. Se optimizó
un protocolo de separación mecánica de las capas muscular, submucosa y
mucosa que permitió identificar estructuras linfoides de pequeño
tamaño. El tratamiento de la mucosa con EDTA, colagenasa y DNAsa
permitió obtener una suspensión celular de la lamina propria y del
compartimiento epitelial. Se realizaron además estudios histológicos e
inmunohistoquímicos.
Estudios
por microscopía evidenciaron la presencia de numerosos folículos
aislados dispersos (duodeno e ileon) y agrupados formando placas de
Peyer (ileon terminal). Estas estructuras se caraterizaron por
inmunohistoquímica y microscopía de fluorescencia, observando acúmulos
de células CD20+ y células dispersas CD3+, CD4+, CD45RO+ en estructuras
compatibles con folículos linfoides aislados maduros. Ocasionalmente
se encontraron vellosidades con hipercelularidad linfocitaria (Lymphocyte filled villi).
Por
citometría de flujo se estudiaron las poblaciones linfoides
mayoritarias del compartimiento epitelial (células T CD8+,
correspondiendo a linfocitos intraepiteliales). En lamina propria, se
detectaron poblaciones CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD20+CD19+, CD20-CD19+ así
como macrófagos (HLA-DR+ CD11c+ CD11b+ CD14+) y células dendríticas
(LIN FITC- HLA-DR+ CD11c+ y LIN FITC- HLA-DR+ CD123+).
Mediante
los protocolos optimizados (disección en capas de la pared intestinal,
digestión enzimática y citometría de flujo, microscopía óptica y de
fluorescencia) se han identificado y caracterizado estructuras linfoides
en un tejido aún poco estudiado. La metodología desarrollada nos
permite a su vez identificar e estudiar las poblaciones relevantes de
lamina propria de intestino delgado humano.