EL DOMINIO HOMÓLOGO A RGS PRESENTE EN GRK2 ES RESPONSABLE DE LA DESENSIBILIZACIÓN DEL RECEPTOR H2 CAUSADA POR AMTHAMINA.

ALONSO NATALIA; GOTARDO FEDERICO; DAVIO CARLOS; FERNADEZ NATALIA; SHAYO CARINA

MAR DEL PLATA

Congreso; LIV REUNION CIENTIFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y LVII REUNION CIENTIFICA Sociedad Argentina de Inmunología (SAI).; 2009

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLINICA

El receptor H2 a histamina (rH2) pertenece a la familia de receptores acoplados a proteína G y su activación conduce a un incremento en los niveles de AMPc. Luego de ser fosforilado y desensibilizado por GRK2 es internalizado y reciclado a la membrana celular. Estudios realizados con una construcción dominante negativa de GRK2 (GRK2K220R) que carece de actividad quinasa, muestran que GRK2K220R desensibiliza al rH2 al igual que la proteína salvaje y bloquea su internalización, sugiriendo que la fosforilación del rH2 por GRK2 no es necesaria para su desensibilización pero es indispensable para su internalización. El objetivo del presente trabajo es discriminar si la desensibilización del rH2 observada con GRK2K220R se debe al impedimento estérico que causa dicha quinasa evitando el acople del rH2 a la proteína G o a la acción del dominio homólogo al regulador de la señalización por proteína G (RGS) presente en GRK2. Para ello realizamos tres construcciones conteniendo los distintos dominios presentes en GRK2K220R: el dominio RH (homólogo a RGS), los dominios KIN-PH (quinasa y de homología a plekstrin) o RH-PH. Ensayos de concentración-respuesta realizados en células HEK293 cotransfectadas con el rH2 y las diferentes construcciones, muestran que en presencia de RH y RH-PH la respuesta máxima de AMPc del rH2 a su agonista amthamina, disminuye en un 39,6% y 46,5% respectivamente, mientras que KIN-PH no modifica la respuesta. Por otro lado, resultados obtenidos en cinéticas de desensibilización indican que la construcción RH-PH causa una mayor atenuación en la respuesta del receptor, disminuyendo el T1/2 de desensibilización de 0,45 min a 0,22 min. Resultados similares fueron obtenidos en células COS7. En base a los resultados obtenidos, concluimos que la desensibilización en la respuesta del rH2, producida por amthamina se encuentra mediada por el dominio RH presente en GRK2 y no por un impedimento estérico causado por dicha quinasa.