EXTRACCIÓN DE TRIPSINA BOVINA A PARTIR DE HOMOGENADO PANCREÁTICO EMPLEANDO SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS DE POLIETILENGLICOL Y CITRATO DE SODIO

TUBIO, G.; PELLEGRINI, L.; NERLI, B.; PICÓ, G.

Recife Brasil

Workshop; I Workshop Internacional em Biotecnología; 2008

Universidad Federal de Pernambuco

Introducción En las últimas décadas ha crecido notablemente el empleo de diferentes tipos de enzimas como catalizadores biológicos de numerosos procesos a nivel industrial. La industria actual tiene requerimientos cada vez más elevados de este tipo de moléculas siendo necesario el desarrollo de métodos rápidos y sencillos de purificación que permitan extraerlas a partir de sus fuentes naturales o de los organismos recombinantes en donde son expresadas. En particular, la tripsina (TRP) es una enzima de alto valor comercial, de uso muy difundido a nivel industrial, farmacológico y en investigación científica. Se almacena en el páncreas de mamíferos en su forma inactiva, el tripsinógeno. Los métodos tradicionales de purificación emplean como fuente de obtención al homogenado pancreático, previa activación del zimógeno y consisten en diferentes pasos cromatográficos que consumen tiempo y son relativamente costosos. La etapa crítica de este proceso es su separación de la quimotripsina (QTRP), otra serin-proteasa almacenada en páncreas que presenta propiedades fisicoquímicas muy similares a las de TRP. El principio de extracción líquido-líquido empleando sistemas bifásicos acuosos (SBAs) representa una alternativa novedosa con diferentes ventajas tales como rapidez, sencillez y bajos costos. Los SBAs empleados con mayor frecuencia en bioseparación han sido los formados por un polímero de cadena flexible (PCF), el polietilenglicol (PEG) y una sal inorgánica como el fosfato de sodio/potasio. Sin embargo, los altas concentraciones de sal requeridas para la formación del bifásico constituyen una desventaja medio-ambiental. En trabajos previos [1] hemos realizado una caracterización sistemática de estos SBAs y hemos estudiado los factores que afectan el equilibrio líquido-líquido. También analizamos los perfiles de reparto de TRP y QTRP bovinas en SBAs formados por PEGs de diferentes pesos moleculares y NaCit a diferentes pHs, hallando que el SBA formado por polietilenglicol de peso molecular 3350 y citrato de sodio pH 5,20 mostraba la mayor capacidad separativa de ambas enzimas