Influencia de la temperatura en la producción relativa de toxinas AAL

VAQUERA, S.; PATRIARCA, A.; CABRERA, G.; FERNÁNDEZ PINTO, V.

Río Cuarto

Congreso; VII Congreso Latinoamericano de Micotoxicología; 2013

Sociedad Latinoamericana de Micotoxicología

Las toxinas AAL pertenecen al grupo de las micotoxinas de estructura similar a la esfinganina (SAMT) y ejercen sus efectos tóxicos a través de la inhibición competitiva de la esfinganina N-acetiltransferasa. La inhibición de esta enzima conduce a diversas enfermedades en animales y seres humanos. Las toxinas AAL son producidas por Alternaria arborescens y son el agente causal de la enfermedad conocida como ?pudrición del tallo? en tomates. A. arborescens ha sido aislada junto con otras especies de Alternaria en lesiones de tomates conocidas como ?enmohecimiento negro? o ?black mould?. Existen muy pocos datos sobre la evaluación de las propiedades toxicológicas y los riesgos para la salud planteados por las toxinas AAL, así como de investigaciones de su biosíntesis y de su ocurrencia natural. El objetivo de este trabajo fue determinar la influencia de la temperatura en la producción relativa de toxinas AAL en Agar Tomate. Se utilizó un cultivo de referencia de A. arborescens (EGS 39-128) que es capaz de producir todas las toxinas AAL (TA, TB, TC, TD, TE) en medios agarizados. Para la producción de micotoxinas, se inoculó la cepa en medio Agar Tomate con aw ajustada con glicerol a 0,950 y se incubó a 6, 15, 20, 25 y 30ºC durante 7, 14, 21, 30 y 40 días. Las toxinas AAL se extrajeron con acetonitrilo-agua (50:50) acidificando con ácido clorhídrico a pH 3. Las muestras filtradas se mezclaron con una solución de cloruro de potasio 1%. El extracto se aplicó a una columna HLB Oasis SPE previamente acondicionada y las  toxinas se eluyeron con acetonitrilo-agua (70:30). Los extractos se analizaron por HPLC-MS en un equipo QTOF de Bruker (MicrOTOF Q II) con HPLC Agilent serie 1200 con inyector automático y detector de arreglo de diodos (DAD). Se realizaron simultáneamente los espectros de masa (MS) y de MS/MS. Los iones moleculares [M+H]+ investigados fueron: AAL TA (m/z 522,3287); AALTB (m/z 506,3324), AAL TC (m/z 490,3374), AAL TD (m/z 548,3396) y AAL TE (m/z 532,3488). Las máximas cantidades relativas de TA, TB, TD y TE se produjeron a 30ºC y 14 días de incubación, observándose la producción de cantidades menores de TA y TE a 20ºC y 40 días de incubación y de TD y TE a 30ºC y a 21 y 30 días de incubación.  No se detectó producción de las toxinas estudiadas en las demás condiciones de tiempo y temperatura. No se detectó TC en ninguna de las condiciones ensayadas. Estos resultados confirman la hipótesis de que la temperatura influencia la síntesis y las cantidades relativas de cada una de las toxinas AAL estudiadas y que además la producción de estas toxinas se ve favorecida por las temperaturas más elevadas (25 a 30ºC), por lo que la refrigeración sería una medida de prevención adecuada. Los resultados de este trabajo podrían ser utilizados para evaluar el riesgo de contaminación por toxinas AAL de productos de tomate.