Estudio de la actividad antipoliovirus de Eupatorium buniifolium

VISINTINI JAIME M.F.; SÜLSEN V; CAMPOS R; MUSCHIETTI L; CAVALLARO L

Cagliari, Italia

Congreso; XIX Congreso Italo-Latinoamericano de Etnomedicina; 2010

Sociedad Italo-Latinoamericana de Etnomedicina

Eupatorium buniifolium H. et Arn. (Asteraceae) es un arbusto conocido vulgarmente como "romerillo," "romerillo colorado," o "chilca" que crece principalmente en el norte y centro de la Argentina, sur de Brasil y Bolivia, Paraguay y Uruguay. La decocción de las partes aéreas de esta planta se utiliza, en forma tradicional, contra dolores reumáticos, en afecciones gastrointestinales y como desinfectante. En estudios previos hemos comprobado, en esta especie, la presencia de flavonoides, derivados del ácido hidroxicinámico y diterpenos del tipo ent-labdanos (1,2) y actividad antiviral contra el virus Herpes simplex (3). El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad de E. buniifolium contra el virus de la poliomielitis humana tipo 2 (PV-2) y tipo 3 (PV-3). Metodología Preparación del extracto: El material vegetal seco y molido (500 g) se extrajo por maceración con una mezcla de CH2Cl2:MeOH (1:1) (2 x 1000 ml) a temperatura ambiente durante 24 h. Se combinaron los extractos orgánicos (EO) y se llevaron a sequedad en un evaporador rotatorio a menos de 40°C Fraccionamiento guiado por bioensayo: Aproximadamente 20 g de EO se fraccionaron por cromatografía preparativa en columna utilizando Silicagel 60 como fase estacionaria y eluyendo sucesivamente con hexano,  hexano: EtOAc (1:1), EtOAc,  EtOAc:MeOH (1:1) y MeOH. De este fraccionamiento se obtuvieron 5 fracciones finales (F1-F5). Ensayo de citotoxicidad: La evaluación de citotoxicidad en células Vero de EO y las fracciones (F1-F5) se realizó mediante el método de MTS/PMS (Promega). Ensayo de actividad antiviral: La actividad antiviral de EO y de las fracciones fue evaluada frente a los virus PV-2  (cepa Sabin) y PV-3 (cepa Sabin) por los métodos de reducción del efecto citopático viral (ECP) y  por  reducción de placas virales (UFP/ml) en células Vero. Resultados: Para EO se determinó una concentración citotóxica 50 (CC 50)  de 78,6 µg/ml y respecto a la actividad antiviral se obtuvieron valores de concentración efectiva 50 (CE50) de 14,75 µg/ml para PV-2 y de 4,75 ug/ml para PV-3. De las 5 fracciones evaluadas, sólo F2, eluída con hexano: EtOAc (1:1), resultó activa frente a PV-2 y PV-3.Se pudo demostrar que EO y F2 no ejercen actividad virucida sobre PV-2 a las  concentraciones de 10 X CE50 y 20 X CE50.  Con el objetivo de estudiar preliminarmente el tiempo de acción de la droga se evaluó el efecto de EO en la etapa de adsorción y post-adsorción del PV-2 a las células Vero. Se demostró que la presencia de EO durante la adsorción no interfiere el proceso, mientras que cuando EO se agrega postadsorción ejerce una inhibición del 92-96%,  efecto similar al obtenido cuando EO está  presente durante todo el ciclo viral. Conclusiones: De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que el extracto orgánico de E. buniifolium contiene compuestos con actividad inhibitoria sobre la replicación de PV-2 y PV-3 y que dicha actividad se ejercería en alguna de las etapas del ciclo viral que ocurren dentro de la célula infectada. Se continúa con la identificación del/los compuestos activos, presentes en F2, y con el estudio detallado del mecanismo de acción antiviral.