La 3metiladenina inhibidor de la autofagia disminuye la funcionalidad mitocondrial de aurículas aisladfas de rata sometidas a isquemia simulada reperfusion

HERMANN, ROMINA; RUSIECKI, TATIANA; VÉLEZ, DÉBORA; MARINA PRENDES, MARÍA GABRIELA; SAVINO, ENRIQUE; VARELA, ALICIA

Mar del Plata

Congreso; LVIII REUNION ANUAL SAIC; 2013

Trabajos anteriores mostraron que en la aurícula izquierda aislada de rata sometida a 75 min Is?75 min Rs, la MA genera mayor desarrollo de contractura durante la Is, aparición de arritmias severas en la Rs, menor respuesta contráctil ante la estimulación β-adrenérgica y frente a dosis crecientes de Ca2+ al finalizar la Is-Rs. A su vez, micrografías electrónicas mostraron un mayor deterioro mitocondrial en la Rs en aurículas sometidas a Is-Rs en presencia de MA. El objetivo de este trabajo fue estudiar la funcionalidad mitocondrial midiendo la velocidad de producción de ATP en mitocondrias aisladas luego del periodo de Is-Rs en ausencia y en presencia de MA (5mM). A su vez, se evaluó la relación LC3II/ LC3I, como indicador de la formación de vacuolas autofágicas, y la proteína p62, que se degrada específicamente por la vía autofagosoma/ lisosoma. Se emplearon aurículas izquierdas aisladas de ratas (Sprague-Dawley) estimuladas a 60/min e incubadas isométricamente en Krebs-Ringer-CO3H- (glucosa 10 mM, O2 95%-CO2 5%, pH 7,4). La Is se inició reemplazando el O2 por N2 y la glucosa por 2-desoxiglucosa 10 mM, pH 6,8-7,0. Se empleó ANOVA (n=8). La determinación de la velocidad de producción de ATP se realizó por luminometría en mitocondrias aisladas al final de la Rs. Por Western Blot se evaluó la relación LC3II/LC3I y p62 a distintos tiempos durante la Is-Rs en presencia y ausencia de MA. Cuando la Is-Rs se realizó en presencia de MA se observó una reducción en la velocidad de producción de ATP (0.61±0.10 vs 0.94±0.09 nmol/min.mg proteína; p