Estudio de la actividad antiviral para el virus de la hepatitis B (HBV) en plantas medicinales de la Argentina

GAGEY D; RETTA D.; SÜLSEN V; MUSCHIETTI L; MARTINO V; CAMPOS R; CAVALLARO L

Cagliari, Italia

Congreso; XIX Congreso Italo-Latinoamericano de Etnomedicina; 2010

Sociedad Italo-Latinoamericana de Etnomedicina

Introducci¨®n: El virus de las hepatitis B (HBV) infecta cr¨®nicamente a 400 millones de personas en el mundo y m¨¢s de 500.000 individuos mueren anualmente por cirrosis y carcinoma hepatocelular asociado a HBV. Existen 5 an¨¢logos de nucle¨®sidos y el interfer¨®n aprobados para el tratamiento de las infecciones cr¨®nicas, sin embargo la resistencia asociada a tratamientos prolongados plantea la necesidad de nuevos antivirales con distinto mecanismo de acci¨®n que puedan ser utilizados en monoterapia o en forma combinada con los ya existentes. El objetivo de este trabajo fue estudiar la actividad in vitro anti HBV de siete plantas medicinales Argentinas pertenecientes a la familia Asteraceae: Bidens subalternans, Eupatorium buniifolium, Baccharis gaudichaudiana, Pluchea sagittali, Ambrosia tenuifolia, Tagetes minuta y Tessaria absinthioides. Materiales y M¨¦todos: Screening inicial: monocapas de c¨¦lulas HepG2 2.2.15 (c¨¦lulas que producen part¨ªculas de HBV infectivas) en placas de 96 pocillos fueron tratadas durante 9 d¨ªas con diferentes concentraciones de infusi¨®n (I), extracto acuoso (EA) o extracto org¨¢nico (EO) de cada una de las plantas, con cambios de medio cada 3 d¨ªas. El d¨ªa 9 se cosecharon los sobrenadantes de cultivo y se determin¨® la citotoxicidad por el m¨¦todo de MTS/PMS. A concentraciones no citot¨®xicas en los sobrenadantes de cultivo se determin¨® la producci¨®n viral mediante la detecci¨®n de HBsAg por el m¨¦todo de ELISA. Confirmaci¨®n de la actividad antiviral: monocapas de c¨¦lulas HepG2 2.2.15 en placas de 24 pocillos fueron tratadas durante 9 d¨ªas, cambiando el medio cada 3 d¨ªas, con diluciones seriadas de EA de Tagetes minuta, a partir de la concentraci¨®n no citot¨®xica. En los sobrenantes correspondientes al d¨ªa 9 post-tratamiento se determin¨® la producci¨®n de HBV mediante cuantificaci¨®n del DNA HBV por PCR en tiempo real y de HBsAg por ELISA. Resultados: Los extractos org¨¢nicos presentaron mayor citototoxicidad que los extractos acuosos y las infusiones. De las 7 plantas estudiadas s¨®lo el EA y la I de T. minuta presentaron un efecto inhibitorio dosis dependiente sobre la producci¨®n del HBsAg.. Se obtuvo una reducci¨®n de 41,24 y 40,64 % para 1 mg/mL , 23,07 y 21,84 % para 500¦Ìg/mL, 16,08 y 19,03 % para 250 ¦Ìg/mL y 3,04 y 4,39 % para 125 ¦Ìg/mL para el EA y la I, respectivamente. Lla determinaci¨®n de los niveles de DNA HBV por PCR en tiempo real no mostr¨® diferencias en las c¨¦lulas tratadas respecto de los controles sin tratar. La determinaci¨®n de HBsAg confirm¨® los valores de inhibici¨®n obtenidos en el screening. Conclusiones: Este trabajo representa la primera evaluaci¨®n de plantas medicinales argentinas con el virus de la hepatitis B. Los resultados obtenidos demuestran que en EA y la I de Tagetes minuta existen una actividad inhibitoria de la producci¨®n de HBsAg. El fraccionamiento bioguiado de dichos extractos permitir¨¢ aislar e identificar el/los compuestos potencialmente activos con el aumento de la actividad antiviral espec¨ªfica. Ser¨¢ importante extender el estudio a otras especies del g¨¦nero y con los compuestos activos determinar el mecanismo mediante el cual se ejerce la inhibici¨®n.