Hidroxi-N-demetilsauroxina, un nuevo alcaloide inhibidor de la acetilcolinesterasa

VALLEJO M; ORTEGA G; CORZO M; ORTEGA M, VALLEJO M, CABRERA J, AGNESE M.

San Luis

Congreso; V Congreso Argentino de Estudiantes de Farmacia; 2017

AEFRA

La Enfermedad de Alzheimer (EA) es una enfermedad neurodegenerativa progresiva, que se caracteriza por la pérdida cognitiva y de memoria, y la formación de placas de beta-amiloide (βA) entre otros marcadores patológicos. Actualmente, existen medicamentos empleados en la EA que no representan un tratamiento definitivo de esta patología. Es por esta razón, que se requiere de fármacos más efectivos y seguros, con posibles nuevos blancos de acción. El Reino Vegetal es una fuente de innumerables estructuras químicas, por lo que constituye una base para el estudio de nuevos principios activos. Phlegmariurus saururus (Lam.) B. Øllg (Lycopodiaceae) es una especie autóctona argentina usada en la medicina popular como mejoradora de la memoria. Algunos de sus componentes mayoritarios (alcaloides) ya han sido dilucidados en estudios realizados previamente y se ha demostrado también, que presentan actividad sobre la memoria. Varios actúan como inhibidores la enzima acetilcolinesterasa (AChE), responsable de degradar la acetilcolina (neurotransmisor afectado en la EA). Es por ello, que el objetivo principal de este trabajo fue identificar uno de los alcaloides minoritarios, Hidroxi-N-demetilsauroxina (OHN), y estudiar su acción sobre la AChE; al mismo tiempo, se buscó también dilucidar la estructura de un nuevo compuesto al que se denominó OHS. Para tal fin, se realizó una extracción alcalina del material vegetal con el empleo de un extractor Soxhlet. Luego, se realizaron particiones sucesivas a diferentes pH con el uso de extractores líquido-líquido. El extracto obtenido, fue purificado mediante el empleo de técnicas cromatográficas con la utilización de diferentes solventes. En primer lugar, se realizaron cromatografías en columna con el uso de distintas fases móviles, y posteriormente, las fracciones resultantes fueron sometidas a cromatografía en capa delgada a escala preparativa. Una vez aisladas OHN y OHS, se procedió al estudio de sus estructuras químicas mediante cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas (CG-EM). A su vez, OHN fue analizada mediante resonancia magnética nuclear (RMN), en una y dos dimensiones; y posteriormente, a fin de conocer su efecto in vitro sobre la actividad de la AChE, se utilizó el método de Ellman adaptado para medición con un lector ELISA. De la interpretación de los resultados obtenidos se concluyó que el compuesto aislado corresponde a (4aR,5S,10bS,12R)-4a-hidroxi-12-metil-2,3,4,4a,5,6,9,10-octahidro-1H-5,10b-propano-1,7-fenantrolin-8(7H)-ona (OHN), diferenciándose de N-demetilsauroxina (NdSx) por la presencia de un grupo hidroxilo en C12, al observarse un desplazamiento de δ=40.1 para NdSx, en relación a δ=60,2 para OHN, en el espectro de 13C obtenido por RMN. Por otra parte, se observó que OHN actúa de forma favorable como inhibidor de la AChE, siendo su CI50 9,32 µg/mL; obteniéndose de este modo, un compuesto más activo que Sauroxina (Sx).Si bien no se concluyó la identificación de OHS, este alcaloide se postula como un posible derivado de Sx y será foco de estudio en análisis posteriores. Así, se postulan nuevas sustancias con capacidad de acción en la EA, las cuales seguirán siendo evaluadas para determinar de forma fehaciente su actividad, en experimentos ex vivo e in vivo.