Síntesis de ésteres de prunina catalizada por lipasa B de Candida antarctica: efecto de la longitud de cadena del donador

GUSTAVO CÉLIZ; MIRTA DAZ

San Luis, Argentina

Otro; III Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones (III EnReBB); 2008

Universidad Nacional de San Luis

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} p.MsoBodyText2, li.MsoBodyText2, div.MsoBodyText2 {margin-top:0cm; margin-right:0cm; margin-bottom:6.0pt; margin-left:0cm; line-height:200%; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:106.3pt 106.3pt 109.15pt 106.3pt; mso-header-margin:35.45pt; mso-footer-margin:35.45pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Muchos factores afectan la actividad sintética de una lipasa. Entre ellos la temperatura, el solvente, sustrato, donador del grupo acilo y sus concentraciones. En trabajos anteriores hemos estudiado diversos aspectos de las reacciones de transesterificación en medios orgánicos utilizando lipasas como biocatalizadores, glucósidos de flavonoides cítricos como nucleófilos y ésteres de vinilo como donadores del grupo acilo. En este trabajo estudiamos el efecto de la longitud de la cadena (C2-C18) de los ésteres de vinilo utilizados como donadores en la reacción de esterificación del glucósido de flavonoide cítrico prunina (naringenina-7-b-D-glucósido) en acetona catalizada por lipasa B de Candida antarctica.     Se utilizó prunina obtenida en nuestro laboratorio a una concentración de 20 mM, lipasa inmovilizada en una resina acrílica (Novozym 435), tamices moleculares de 4 Å Sigma (0.1g/mL) y ésteres de vinilo en concentración fija de 100 mM (Sigma y Fluka). En tubos con tapón a rosca se colocaron sustrato, solvente, el éster de vinilo y el tamiz molecular (volumen final 3 mL). Los tubos se colocaron en baño termostático con agitación (200 rpm) a 40ºC antes de iniciar las reacciones con el agregado de la enzima (10, 20 y 50 mg). Las conversiones se siguieron midiendo las concentraciones de prunina en función del tiempo por HPLC usando una columna RP-8 LiChrospher 100 Merck de 25 cm de longitud, elución isocrática con fases móviles de acetonitrilo:agua en proporciones variables según el éster sintetizado y  detección a 280 nm. Los ensayos se realizaron por triplicado. En todos los casos sustratos y productos fueron solubles en el medio de reacción. Cuando se utilizó como donador acetato de vinilo se obtuvieron dos productos de reacción. En todos los otros casos sólo se observó un producto que corresponde a la esterificación del C6 de la glucosa. Los rendimientos alcanzados a las 24 h superaron el 80% independientemente de la longitud de cadena del donador utilizado. Por otro lado, los resultados obtenidos muestran que la actividad sintética inicial decrece a medida que se incrementa la longitud de la cadena del donador de acilo. Una revisión bibliográfica de reacciones similares a la estudiada con la misma enzima, sustratos polihidroxilados, incluyendo azúcares y glicósidos de flavonoides en medios orgánicos no conduce a un criterio unificado. En algunos trabajos se informa una mayor actividad sintética cuando se utilizan ácidos grasos de longitud de cadena intermedia o alta y en otros un comportamiento opuesto. En líquidos iónicos se informa un resultado similar al nuestro para la esterificación de naringina con ácidos grasos y ésteres de vinilo como donadores. La especificidad de esta enzima para este tipo de reacciones no está del todo clara y es aún materia de debate. Nuestros resultados sugieren que,  entre otros factores, podría ser importante el efecto de difusión del éster donador del acilo hasta el sitio activo a través de la partícula que soporta a la enzima. Esto explicaría la mayor actividad sintética inicial a menor longitud de cadena del éster donador.