Evaluación por UV MALDI TOF de los lipopéptidos involucrados en la inhibición de Salmonella enterica serovar. Enteritidis por cepas de Bacillus spp.

TORRES M.J.; PETROSELLI G.; ERRA-BALSELLS R.; AUDISIO, M.C.

Santa Fé

Jornada; III Congreso Bioquímico del Litoral y XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Colegio de Bioquímicos de Santa Fe-Primera Circunscripción y la Filial Santa Fe de la Asociación Argentina de Microbiología

La bacteria Gram-negativa Salmonella enterica serovar. Enteritidis, , que en los últimos años ha mostrado resistencia a los agentes antimicrobianos utilizados comúnmente en la industria alimentaria, es la causa más común de toxiinfección por alimentos. Esta situación motiva la búsqueda de nuevas alternativas de biocontrol. Una posibilidad interesante la constituyen las bacterias del género Bacillus, conocidas por sus fuertes propiedades antimicrobianas a través de la síntesis, principalmente, de lipopéptidos cíclicos, tales como surfactina, iturina y fengicina. El objetivo de este trabajo fue estudiar la actividad inhibitoria de 2 cepas de B. amyloliquefaciens (CBMDDrag3, PGPBacCA2) y de B. subtilis subsp. subtilis BacCA4f frente a 3 cepas de S. Enteritidis (CUB 73/10, CUB 22/10 y CUB 03/08) y caracterizar sus metabolitos bioactivos por espectroscopía de masa con volatilización (desorción)/ionización fotosensibilizada por una matriz e inducida por láser ultravioleta (UV- MALDI-MS). La actividad anti-Salmonella de la suspensión celular de cada cepa de Bacillus fue evaluada por el método de difusión en agar y la presencia de un halo de inhibición alrededor de la colonia bacteriana reveló el efecto inhibitorio. Para la caracterización de los metabolitos bioactivos se extrajo un tapón de 4 mm de: I) la colonia bacteriana y II) la zona de inhibición. Luego, ambas muestras fueron colocadas en 0,5 mL de agua destilada a pH 8 y se procedió a agitarlas vigorosamente durante 30 s. Finalmente, se realizó el análisis de cada muestra según la técnica UV-MALDI-MS. Los resultados mostraron que las tres cepas de Bacillus, al crecer en medio sólido, produjeron inhibición del crecimiento de las 3 cepas de S. Enteritidis evaluadas, generando halos de inhibición de 10 a 12 mm de diámetro. Debido a que las cepas de Salmonella presentaron sensibilidad similar frente a las diferentes cepas de Bacillus, se seleccionó a CUB 73/10 para el estudio por espectrometría de masa de los metabolitos involucrados en la actividad inhibitoria. A través del análisis de las colonias bacterianas por UV-MALDI TOF se detectó la presencia de homólogos de surfactina e iturina en las tres cepas de Bacillus; mientras que solo CBMDDrag3 sintetizó además homólogos de fengicina frente a CUB 73/10. Por otro lado, también se identificó surfactina e iturina en las zonas de inhibición producidas por las tres cepas de Bacillus frente a S. Enteritidis. Cabe destacar que en dichas zonas de inhibición se detectó mayor cantidad de homólogos de iturina que de surfactina (3:1, respectivamente). Los resultados de este trabajo son promisorios debido a la potencial actividad inhibitoria mostrada por las cepas de Bacillus amyloliquefaciens evaluadas frente a S. Enteritidis, un importante patógeno transmitido por alimentos. El análisis por UV-MALDI-MS permitió la identificación de los principales lipopéptidos involucrados en la acción inhibitoria.