Validación de sistemas de marcadores genéticos para identificar contaminación fecal en aguas

HÉCTOR A. CRISTÓBAL; RAMIRO POMA; VERÓNICA RAJAL

San Luis

Congreso; Congreso Nacional del Agua; 2013

El agua es el principal vehículo de exposición humana a los peligros microbiológicos llegando a ellos por el consumo, actividades recreativas, irrigación o en la conformación de aerosoles. El presente trabajo tiene un enfoque novedoso encaminado a la búsqueda de nuevos indicadores para detectar la contaminación fecal en aguas, técnica denominada rastreo de la fuente de contaminación microbiana (Microbial Source Tracking). El método se basa en la detección de marcadores moleculares en el ADN ribosomal 16S de los Bacteroides y permiten identificar las fuentes de contaminación fecal en aguas. Estos indicadores corresponden a microorganismos perteneciente al genero Bacteroides, los cuales son componentes naturales de la flora intestinal de animales de sangre caliente, es decir son los constituyentes de las heces humana y animal. El objetivo propuesto para la identificación de estos microorganismos en aguas, primero es necesario realizar la validación de la metodología en nuestra región geográfica. Para lo cual se utilizaron muestras fecales a partir de diferentes poblaciones (humanas, caninas, felinas y rumiantes). Las muestras fueron empleadas para la extracción de ADN, y luego utilizadas para validar mediante PCR en tiempo real los sistemas BacHum y AllBAC (sistemas de cebadores y sondas TaqMan) que identifican Bacteroides humanos y universales respectivamente. A partir de un total de 22 muestras fecales humanas, 17 fueron verdaderos positivos para los dos sistemas evaluados. Asimismo, ambos sistemas fueron evaluados con siete miembros de cada población de animales, en el cual se observaron amplificaciones positivas para todas las muestras con el sistema AllBac. Con el sistema BacHum se observaron solo dos reacciones cruzadas con muestras de animales (falsos positivos). Por lo tanto, los resultados obtenidos permiten evaluar que el sistema BacHum identifica Bacteroides humanos con una específicidad del 77%, como así también permite diferenciarlos de los Bacteroides de origen animal con una sensibilidad del 93%. De este modo, estos resultados permiten seleccionar al sistema BacHum para informan si el origen de la contaminación fecal es humana. Se espera que estos sistemas validados se puedan aplicar exitosamente en fuentes de agua: río, laguna, dique, residuales y subterráneas, y determinar el origen de contaminación fecal.