Efecto de surfactina sobre la integridad estructural de esporos de Nosema ceranae

MARTÍN P. PORRINI; NEGRI PEDRO; M. CARINA AUDISIO; DANIELA C. SABATÉ; MARTÍN J. EGUARAS

Mar del Plata

Congreso; 34° Congreso Argentino de Producción Animal - 1 st Joint Meeting AAPA-ASAS; 2011

Asoc. Argent. Prod. Animal (AAPA)

34° Congreso Argentino de Producción Animal - 1 st Joint Meeting AAPA-ASASSA 14 Efecto de surfactina sobre la integridad estructural y viabilidad de esporos deNosema ceranae. Porrini*, M.P., Negri, P., Audisio, C.M., Sabaté, D. C. y Eguaras, M.J.Lab. de Artrópodos, FCEyN, UNMdP. CONICET. FONCyT. CONICET. INIQUI, UNSa. Argentina.*mporrini@mdp.edu.arEffect of surfactin on structural integrity of Nosema ceranae sporesNosema ceranae ha parasitado recientemente a Apis mellifera y constituye la principalmicrosporidiosis en la abeja adulta, causando importantes pérdidas económicas. El únicomedicamento disponible (Fumagilina) actúa sobre la fase vegetativa del parásito, sin afectar losesporos de resistencia. Una cepa de Bacillus subtilis (aislada de A. mellifera) sintetiza unasurfactina (lipopéptido) que ha mostrado en ensayos in vivo un efecto inhibitorio sobre esporosde N. ceranae. El objetivo fue evaluar la forma de acción de este metabolito bajo diferentestiempos de exposición, utilizando microscopía electrónica de barrido (SEM) para detectaralteraciones en la morfología externa y tinción con las sondas fluorescentes Sitox green y DAPI(4`,6-diamidino-2-fenilindol) para cuantificar esporos sin integridad en membrana (inviables), conintegridad de membrana (viables) y con su contenido extruido (vacíos). Esporos purificados sepusieron en contacto con la surfactina por 30 min., 3hs y 24hs y se acondicionaron para ambasmicroscopías. Para la SEM, los esporos fueron fijados en glutaraldehído, deshidratados,tratados con HMSDS y montados para fotografía. Para la microscopía de epifluorescencia,alícuotas de ~5x105 esporos fueron incubadas con las sondas y se realizaron extendidos parala cuantificación. Esporos inviables se visualizaron como óvalos verdes (filtro 470-490nm) yturquesas (filtro 395-415nm); esporos viables se visualizaron solo en color turquesa; esporossin contenido se visualizaron solo en campo claro. Las tinciones con sondas mostraron unefecto inhibitorio a partir de las 3hs (Cuadro 1). No se registraron diferencias significativas entretiempos de exposición. La disrupción en la integridad de la membrana esporular sería la causade muerte del esporo, dado que no se cuantificó extrusión significativa del contenido esporularni alteraciones morfológicas evidentes en la superficie (SEM).Cuadro 1: Porcentaje de esporos muertos y extruidos ± desvío estandar. SURF.: surfactina resuspendidaen H2Od, 10 mg/mL CTRL.: H2Od. s/d: sin datos. Letras mayúsculas indican diferencias significativasentre diferentes tiempos de exposición (ANOVA). Asterisco indica diferencias significativas con CTRL,excepto tratamiento SURF 30min. (Mann-Whitney).
=0,05 para ambos test.% Esporos Muertos±d.est.Valor P(Mann Whitney).%Esporos contenidoextruído ± d.estSurfactina 30 minutos 25,37±13,67 A s/dSurfactina 3 horas 28,85±13,43 A* (p=0,035) s/dSurfactina 24 horas 32,88±16,45 A* (p<0,001) 0,48±2,61CTRL. 3 horas 21,94±15,89 s/dCTRL. 24 horas 19,98±11,15 9,82±19,76Palabras clave: Apis mellifera, Nosema ceranae, surfactina, sondas fluorescentes.Key words: Apis mellifera, Nosema ceranae, surfactin, fluorescent probes.