PROTEASAS CISTEÍNICAS EN LAS “VACUOLAS ASOCIADAS A LA SENESCENCIA” DE HOJAS DE TABACO

CARRIÓN, CRISTIAN A.; COSTA, M. LORENZA; MARTÍNEZ, DANA E.; GUIAMET, J. JOSÉ

Rosario - Santa Fé

Jornada; XIII Reunión Latinoamericana y XXVII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal.; 2008

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

PROTEASAS CISTEÍNICAS EN LAS “VACUOLAS ASOCIADAS A LA SENESCENCIA” DE HOJAS DE TABACO Cristian Carrión, M. Lorenza Costa, Dana E. Martínez, Juan J. Guiamet jguiamet@fcnym.unlp.edu.ar Instituto de Fisiología Vegetal (INFIVE) -CONICET-UNLP- Diag. 113 y 61, La Plata. La degradación del aparato fotosintético es el evento más característico de la senescencia foliar. Diversas evidencias indican que varias proteínas fotosintéticas, incluyendo Rubisco, son degradadas fuera de los cloroplastos, en una  clase específica de vacuolas que hemos llamado “Vacuolas Asociadas a la Senescencia” (VAS). Las VAS se caracterizan por un pH luminal ácido, y una alta actividad de proteasas serínicas y cisteínicas. El objetivo de este trabajo fue examinar la participación de proteasas serínicas y cisteínicas en la degradación de Rubisco dentro de las VAS.  Se aislaron VAS de hojas senescentes de tabaco y se llevaron a cabo experimentos de autodigestión empleando la Rubisco contenida en las VAS como sustrato. La degradación de Rubisco fue inhibida por un cocktail de inhibidores de proteasas, y por el agregado de E-64, un inhibidor específico de proteasas cisteínicas. La degradación de Rubisco fue insensible a los inhibidores de proteasas serínicas. Con el objeto de identificar las proteasas cisteínicas presentes en las VAS, se condujeron experimentos de marcación in vitro con el inhibidor biotinilado DCG-04. En extractos crudos se detectaron tres bandas principales correspondientes a proteasas cisteínicas, con masas moleculares aparentes de 48, 40 y 19.5 kDa. En las VAS aisladas se detectaron las bandas de 48 y 40 kDa, que corresponden a las más abundantes en el extracto crudo. Estos resultados confirman observaciones previas por microscopía confocal que muestran que la mayor parte de la actividad de proteasas cisteínicas en las células senescentes se localiza en las VAS, e indican que proteasas de esta clase cumplen un papel muy importante en la degradación de las proteínas solubles del estroma del cloroplasto.