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FORMULACIÓN Y ESTUDIOS IN-VITRO DE NANOCÁPSULAS LIPÍDICAS DE PRAZIQUANTEL PARA EL TRATAMIENTO DE LA ESQUISTOSOMIASIS.E. Arrúa,1 G. Bastiat,2 C. Caffrey,3 C. Salomon.1,41IQUIR-CONICET, Rosario, Argentina. 2UFR Sciences Pharmaceutiques et Ingénierie de la Santé, MINT, UMR-S 1066. Angers, France. 3Center for Discovery and Innovation in Parasitic Diseases, Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, University of California San Diego, U.SA. 4Área Técnica Farmacéutica, Departamento Farmacia. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, UNR, Suipacha 531, S2002LRK Rosario, Argentina.INTRODUCCIÓNEl Praziquantel (PZQ) es un antihelmíntico de amplio espectro utilizado para tratar helmintiasis producidas por tremátodos y céstodos (ej. Schistosoma, Hymenolepis spp.). PZQ pertenece a la clase II en el Sistema de Clasificación Biofarmacéutica y su solubilidad en agua es la etapa limitante de su absorción. La formulación de este tipo de fármacos plantea numerosos e importantes problemas derivados del hecho de que su biodisponibilidad oral es incompleta, variable y dependiente de diversos factores. En este contexto, una alternativa nanotecnológica es la formulación de nanocápsulas lipídicas. Éste es un proceso de recubrimiento de los fármacos con materiales de distinta naturaleza, para dar lugar a partículas de tamaño nanométrico. Una de las técnicas recientemente desarrolladas para la elaboración de este tipo de partículas es el método de inversión de fase, que permite la formación de nanocápsulas a través de una manipulación térmica de un sistema aceite/agua.OBJETIVOS El objetivo de este trabajo fue formular, caracterizar y evaluar in-vitro nanocápsulas lipídicas (NCL) de PZQ para el tratamiento de la esquistosomiasis.METODOLOGÍAFormulación de NCL de 50 nm. Se mezclaron los componentes a temperatura ambiente durante 5 minutos, la emulsión resultante fue sometida a 3 ciclos de temperatura de entre 55 a 90 ºC. En el tercer ciclo, durante el descenso de la temperatura se hizo el último agregado de agua a 4 ºC para la dilución de la suspensión de NCL en el punto en que se da la inversión de fases. Para las nanocápsulas elaboradas se empleó: Kolliphor HS 15, Lipoid 75.3, NaCl y Labrafac. Para la elaboración de NCL conteniendo PZQ, se disolvió previamente en acetona en una concentración de 20 mg/ml, y la solución obtenida fue incorporada sobre Labrafac, manteniéndose en agitación constante. Una vez eliminada la acetona, se agregan los componentes en las proporciones antes mencionadas y se somete a los tres ciclos de temperatura de 55 a 90 ºC. Las NCL fueron ensayadas por triplicado. Diámetro hidrodinámico (DH), índice de polidispersidad (IP), potencial zeta (PZ) y conductividad (COND). Las medidas de DH, IP, PZ y COND fueron realizadas a 25 °C sobre las suspensiones de NCL diluidas en un factor de 60 en volumen.Activación del complemento. Se evaluó la activación del sistema del complemento en suero humano normal mediante la medición de la capacidad hemolítica residual del sistema luego de estar en contacto con las NCL blanco y las NCL de PZQ. Para esto las suspensiones fueron diluidas hasta una concentración final de 5 mg/ml de NCL. Cultivo celular. Se realizaron 6 diluciones de las NCL blancos y NCL conteniendo los fármacos para ensayar la viabilidad celular en presencia de estas. Las diluciones ensayadas fueron: 2, 4.5, 10, 20, 45 y 100 mg/ml. Ensayos in vitro sobre gusanos S. mansoni. Se llevaron a cabo experimentos in vitro sobre gusanos adultos S. mansoni en placas. Se estudió el efecto de las NCL de PZQ y NCL blanco en diferentes concentraciones y distintos tiempos. Además se comparó con el efecto del PZQ sin tratar.RESULTADOSDiámetro hidrodinámico, índice de polidispersidad, potencial zeta y conductividadLos resultados se muestran en la tabla 1. En todos los casos los valores de tamaño promedio obtenido fueron cercanos a los esperados (50 nm). Para todas las muestras los valores de índice de polidispersidad fueron inferiores a 0,08 nm, podemos decir que las partículas formuladas tienen un tamaño homogéneo. El valor de conductividad para todas las suspensiones ensayadas fue cercano a 0,6 mS/cm. Tabla 1 Diametro hidrodinámico, IP, PZ y conductividad de las NCL.BlancoPZQDH (nm) 56,356,761,453,458,755,4IP (nm) 0,060,040,030,050,060,06PZ (mV) -7,55-3,96-4,8-12,3-5,43-5,41COND (mS/cm) 0,650,580,570,590,920,69Activación del complementoEn los casos en los que se emplearon NCL conteniendo PZQ se observa que la activación del sistema del complemento es similar a lo que ocurre con las LNC vacías. Esto podría que el PZQ en estos casos ensayados estaría encapsulado dentro de las LNC. Cultivo celularTanto en las NCL blanco como las NCL conteniendo PZQ la proporción de células supervivientes fue similar entre sí y a las NCL vacías, tanto a las 24 como a las 48 horas. Ensayos in vitro sobre gusanos S. mansoniLos resultados obtenidos indicaron que la capacidad de inmovilizar e influenciar la disminución de tamaño de los gusanos fue similar para las NCL de PZQ respecto al PZQ sin tratar, mientras que al trabajar con NCL blanco no se observaron efectos significativos sobre los gusanos. En este sentido podemos afirmar que las NCL de PZQ son activas frente a S. mansoni.CONCLUSIONESLos resultados muestran que las NCL blancos y NCL de PZQ exhiben un tamaño similar y cercano a 50 nm. El IP en todos los casos fue menor o igual a 0,08, lo que indica una distribución de tamaño homogénea.Se observa una activación del sistema del complemento para las NCL de PZQ similar a la de las NCL blancos, lo que podría indicar la presencia del fármaco en el interior de las cápsulas.Las NCL blancos y NCL de PZQ presentan resultados similares respecto la supervivencia celular tanto a las 24 como a las 48 horas.Se demostró actividad contra gusanos S. mansoni para las NCL de PZQ mediante ensayos in vitro. Las NCL cargadas con PZQ representan una importante alternativa para una distribución eficiente de dicho agente antiparasitario.