Diseño de un bioelectrodo reutilizable para diagnosticar infección por Trypanosoma cruzi con detección electroquímica

BELLUZO, M.S.; RIBONE, M. E.; CAMUSSONE, C.; GONZALEZ, V.; MARCIPAR, I. S.; LAGIER, C. M.

Rosario

Congreso; VIII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2008

Sociedad Argentina de Protozoología

Se había demostrado la factibilidad de un inmunoensayo con bioelectrodos que utilizaban homogenado del parásito para detectar IgG anti-T. cruzi.1 En este trabajo, el dispositivo se ensambló utilizando proteínas recombinantes conteniendo FRA y SAPA,2 el fragmento de fusión del vector pET32a y residuos de Lys, adicionados para mejorar el anclado orientado. Se ensayó la unión covalente de las proteínas al electrodo, previa activación con carbodiimida. El inmunoensayo se realizó siguiendo el mismo protocolo que en los ELISA comerciales, modificándose sólo la etapa final. La lectura se inició inmediatamente luego de incubar con anticuerpo marcado con HRP, adicionando el sustrato de la enzima y un mediador redox, que actúa como co-sustrato de la enzima. La señal registrada fue la corriente de reducción del co-sustrato, trabajando a un potencial constante. La corriente aumentó con la concentración de anticuerpos anti-T. cruzi habiéndose obtenido una sensibilidad del mismo orden de la obtenida cuando los ensayos se realizaron sobre el mismo pool de sueros positivos, utilizando un kit de ELISA comercial. Luego del tratamiento con agentes caotrópicos los bioelectrodos fueron regenerarlos y reutilizados hasta 10 veces consecutivas antes que la señal disminuyera por debajo del límite del cut-off. Referencias 1 Ribone ME, Belluzo MS, Pagani D., Marcipar IS and Lagier CM. 2006. Anal. Biochem. 350, 61-70. 2 Camussone C, Amadio A, Lagier CM, Marcipar IS. Construcción de un antígeno quimérico para el diagnóstico de Chagas, con bioelectrodos amperométricos. 7° Cong. Arg. SAP, 2005.