Desarrollo de una técnica de lectura visual para detectar toxoplasmosis aguda

COSTA, J. G.; FACCENDINI, P. L.; LAGIER, C. M.; MARCIPAR, I. S.

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias.; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

La toxoplasmosis, infección causada por el parásito Toxoplasma gondii, puede ser transferida al feto con graves consecuencias cuando la embarazada la adquiere en el curso de la gestación. El tratamiento precoz disminuye el riesgo de transmisión congénita. Por ello es de suma importancia el diagnóstico certero de la fase aguda de la infección durante el embarazo. Considerando la alta seroprevalencia de IgG específica en la población y que los anticuerpos (Acs) IgM específicos pueden persistir mas allá de la fase aguda, los ensayos serológicos disponibles en el mercado, en muchos casos, no permiten definir inequívocamente el estadio infectivo, impidiendo tomar acciones terapéuticas adecuadas para cada caso. Una estrategia para abordar el desarrollo de nuevas técnicas eficaces de diagnóstico, es diseñar ensayos que utilicen antígenos (Agns) proteicos del parásito, que sean reconocidos sólo por Acs de fase aguda. Entre los Agns más promisorios para este fin se encuentra la proteína P35. En este trabajo, se emplearon como Agns dos regiones de esta proteína que se superponen por 47 aminoácidos (AA): la P35A (del AA 1 al 95) y la P35B (del AA 48 al 145). Se desarrolló un procedimiento factible para laboratorios de baja complejidad, basado en un ensayo Dot Blot con lectura por inspección visual y posterior cálculo de un ?score?. La técnica consiste en enfrentar, al suero diluido del paciente con 5 concentraciones decrecientes del Agn recombinante inmovilizado en una membrana de nitrocelulosa. Luego de incubar las tiras reactivas con Ac anti-IgG humana conjugado marcado con peroxidasa, se revela la presencia del complejo formado por reacción con el sustrato enzimático H2O2 y el cromógeno diaminobenzidina. La lectura de las señales obtenidas para cada concentración de Agn se realiza visualmente, otorgando un puntaje a cada una según la intensidad de color sea alta, baja o no visible. Con estos valores se calcula un score para el suero estudiado.