EFECTOS DIFERENCIALES DE SILIMARINA Y SU COMPONENTE ACTIVO SILIBININA SOBRE LA ESTABILIDAD DE LA MEMBRANA PLASMATICA Y LA LISIS HEPATOCELULAR

BASIGLIO, CECILIA L; SANCHEZ POZZI, EJ; MOTTINO, ALDO D; ROMA, MARCELO G

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XV Congreso Argentino de Hepatología; 2009

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)

Introducción y objetivos: La silimarina (SIL) es un extracto natural ampliamente utilizado como hepatoprotector. Está compuesto principalmente por flavonolignanos y, en menor medida, por flavonoides y compuestos polifenólicos. La estabilización de membranas es considerada uno de los principales mecanismos por los cuales SIL ejerce protección. Esto es de particular importancia en patologías colestásicas, donde la acumulación de sales biliares detergentes puede ocasionar lisis de la membrana hepatocelular y/o colangiolar. La silibinina (SB) es el principal flavonolignano de la SIL y se asume que es responsable de sus propiedades beneficiosas, aunque esto no ha sido corroborado sistemáticamente. Por lo tanto, analizamos comparativamente los efectos de SIL y SB sobre la estabilización de la membrana plasmática hepatocelular. Métodos: Se utilizaron dos modelos: i) hepatocitos aislados de rata y liberación al medio de incubación de las enzimas citosólicas LDH y ALT, y ii) membranas plasmáticas hepatocelulares aisladas y análisis de la auto-extinción de la fluorescencia de la octadecilrodamina B, una sonda membranotrópica que permite monitorear la transición de membrana bilipídica a micelas (disolución total) ocasionada por tensioactivos. Resultados: SIL (500 µM en SB) protegió significativamente a la membrana plasmática del daño inducido por el detergente Tritón X-100 (TX-100) y por la sal biliar endógena tauroquenodesoxicolato (TQDC) en ambos modelos (Tabla 1; *p < 0,05 vs Control; #p < 0,05 vs SIL). En cambio, SB (500 µM) exacerbó la disrupción de membranas aisladas inducida por TX-100 en ambos sistemas hasta la concentración del detergente que indujo máxima lisis, mostrándose como estabilizador sólo a concentraciones mayores de tensioactivo. Cuando se utilizó TQDC como detergente, SB tuvo siempre un menor efecto estabilizador comparado con SIL en ambos modelos. Debido a que los detergentes inducen lisis celular no sólo por solubilización lipídica, sino también por formación de poros de membrana con la consiguiente hinchazón osmótica de la célula, evaluamos la capacidad de SIL y SB para prevenir la lisis osmótica inducida por medios de osmolaridad decreciente (300 a 0 mOsm). SB, pero no SIL, sensibilizó la membrana plasmática a la lisis osmótica. Conclusión: SIL y SB tienen efectos diferenciales sobre la estabilidad de membrana: mientras que SIL muestra consistentemente efectos estabilizadores, SB puede exacerbar la lisis hepatocelular (por ej., por TX-100 o estrés osmótico) o ejercer sólo efectos estabilizadores mínimos (lisis por TQDC). Tal efecto diferencial debería tenerse en cuenta en el diseño de formulaciones farmacéuticas alternativas de SIL conteniendo sólo SB (tendencia actual), ya que otros componentes de SIL pueden ejercer efectos hepatoprotectores que, incluso, contrarresten efectos deletéreos de la SB. Tabla 1. Efecto diferencial de SIL y SB sobre la lisis hepatocelular y la disrupción de membrana                             Lisis hepatocelular (C50)                   Solubilización de membranas plasmáticas (C50)                    TX-100 (% v/v)           TQDC (mM)                    TX-100 (% v/v)              TQDC (mM) Control        0.019 ± 0.002             1.8 ± 0.3                          0.026 ± 0.001                7.1 ± 0.1 SIL              0.030 ± 0.005*            4.0 ± 0.6*                         0.046 ± 0.003*             18.4 ± 0.3* SB               0.012 ± 0.003*#         2.5 ± 0.4*#                       0.033 ± 0.003#             10.8 ± 0.3*#