Papel de calmodulina (CaM) en la muerte hepatocelular por apoptosis inducida por tert-butilhidroperóxido (tBOOH): Rol de protein kinasa II dependiente de CaM (CaMKII)

TOLEDO, F.D.; PÉREZ L.M.; OCHOA, J.E.; SÁNCHEZ POZZI E.J.; ROMA M.G.

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-AR; mso-fareast-language:ES-AR;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> El estrés oxidativo hepatocelular induce apertura de poros de transición de permeabilidad mitocondrial (PTPM), con el consiguiente escape de citocromo c (cit c) al citosol; éste activa la cascada proteolítica de caspasas que conduce a la muerte celular por apoptosis. Este fenómeno es facilitado por las elevaciones de Ca2+ citosólico secundarias al estrés oxidativo, pero los factores que explican esta dependencia son desconocidos. En este estudio, indagamos la participación de la vía de señalización Ca2+-CaM-CaMKII en dicho mecanismo, exponiendo hepatocitos aislados al agente pro-oxidante tBOOH (500 µM). tBOOH elevó el Ca2+ citosólico aprox. 26 veces (p<0.001), e incrementó la lipoperoxidación (+723%; p<0.01) y la relación GSSG/GSH (+131%; p<0.01). La formación de PTPM inducida por tBOOH, estimada por la despolarización de membrana mitocondrial medida con tetra-metil-rodamina como parámetro subrogado, fue prevenida por BAPTA (quelante de Ca2+ intracelular), W7 (inhibidor de CaM) y KN62 (inhibidor de CaMKII), en una magnitud similar a la prevenida por el bloqueante de PTPM ciclosporina A (CsA) (aprox. –30%, p < 0.025). tBOOH incrementó el % de células exhibiendo fluorescencia de membrana asociada a FITC-anexina V, un indicador de apoptosis, y tanto W7 como KN62 previnieron significativamente este proceso (Control: 6±1%, tBOOH: 50±4%*, tBOOH+W7: 8±1%#, tBOOH+KN62: 14±2%*#; *p < 0.05 vs. Control, # p < 0.05 vs. tBOOH). La liberación a citosol de cit c mitocondrial, medida por Western blotting en fracciones citosólicas, fue aumentada por tBOOH un 40% (p<0.01), y ese aumento fue prevenido por W7 y KN62 (p < 0.05). Concluimos que las elevaciones de Ca2+ mitocondrial provocadas por estrés oxidativo producen apoptosis por la vía mitocondrial (intrínseca) a través de la apertura de PTPM y liberación de cit c, y que la vía de señalización Ca2+-CaM-CaMKII sería un factor clave en la inducción de dicho proceso.