La quinasa dependiente de AMPc media la apoptosis inducida por deprivación de glucosa en células hepáticas

FERRETTI, AC; FAVRE, C,; PELLEGRINO, JM; LAROCCA, MC

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La glucólisis y la apoptosis son procesos conservados evolutivamente, que cuentan con una fina regulación. Ambas vías se conectan en diferentes niveles, aunque la relación no está totalmente dilucidada. Los hepatocitos tienen un rol clave en el metabolismo de la  glucosa. La quinasa dependiente de AMP cíclico (PKA) media la modulación de diversas funciones del hepatocito, siendo asegurada su especificidad a través de la compartimentalización por sus proteínas de anclaje (AKAPs). Nuestro objetivo fue estudiar si la deprivación de glucosa induce apoptosis en cultivo primario de hepatocitos o en células hepáticas inmortalizadas, y si PKA está involucrada en la vía. Hepatocitos de rata y células HepG2 derivadas de hepatocarcinoma fueron incubados durante 6 h en presencia (C) o ausencia (Glc0) de glucosa, con o sin el inhibidor de PKA H89. La viabilidad celular, evaluada por la exclusión del colorante Azul de Tripán y por la liberación de lactato deshidrogenasa, no difirió entre grupos. La falta de glucosa indujo la activación de la Caspasa 3 en cultivo primario de hepatocitos (C: 8.6 ± 1.8 pmol producto/min/mg proteína (pUA/mg); Glc0: 12.0 ± 2.2 pUA/mg; p < 0.05) pero no en células HepG2. Este efecto fue prevenido por la incubación con H89 (C + H89: 7.6 ± 4.7 pUA/mg; Glc0 + H89: 7.0 ± 2.7 pUA/mg). Estos resultados fueron consistentes con el análisis microscópico de fragmentación nuclear por tinción con DAPI. Nuestros estudios indican que la deprivación de glucosa induce apoptosis en hepatocitos normales, pero no en células HepG2, y que PKA participa en la activación de esta vía de muerte celular. Existe un complejo ensamblado por la AKAP WAVE-1 en mitocondrias hepáticas que asocia la glucoquinasa, enzima clave en la utilización de la glucosa por el hepatocito, PKA, y la proteína proapoptótica BAD. En estudios futuros analizaremos si este complejo tiene un rol en la integración del metabolismo de la glucosa y la apoptosis en hepatocitos normales.