EVIDENCIAS DE LA INTERACCIÓN DEL POLIETILENGLICOL CON PEPSINA Y QUIMOSINA.

DARÍO SPELZINI; N. IMELIO; FARRUGGIA, B.; G. PICÓ

Rosario

Congreso; Reunión anual de la Sociedad de Biologia de Rosario; 2006

Sociedad de Biología de Rosario

La pepsina y la quimosina son proteasas ácidas muy empleadas en la industria. Ambas proteinas poseen un peso molecular de 35.000 con pH isoeléctricos de 4,6 (quimosina) y 1,0 (pepsina). Con el objeto de diseñar métodos de aislamiento y purificación de dichas proteínas desde fuentes naturales utilizando sistemas bifásicos acuosos (SBA) se caracterizó el perfil del reparto de ambas en SBA de polietilenglcol (PEG) / fosfato de potasio a pH 7 y se observó que ambas proteínas se reparten en estos sistemas a favor de la fase PEG con un coeficiente de reparto elevado (entre 4 y 30) lo que sugiere una alta afinidad por el polímero y un caracter altamente hidrofóbico en la superficie de las proteínas expuesta al solvente. Con el objeto de analizar el tipo de interacción entre el polímero predominante en la fase superior de los SBA (PEG) y éstas proteínas se diseñaron experiencias espectroscópicas y de estabilidad termodinámica de las proteínas en estos medios. Se estudió la dependencia de la longitud de onda del máximo de los espectros de emisión de fluorescencia de las proteínas en presencia y en ausencia de los PEG de distintos pesos moleculares y en presencia y ausencia de urea 1M, el quenching de la fluorescencia nativa, con acrilamida, de las proteínas en los mismos medios. Los estudios de fluorescencia permiten cuantificar lo que sucede en las proximidades de los entornos de los triptófanos de las proteínas, los resultados indican que la urea destruiría los complejos PEG-proteína en forma diferente según el pH. Además se estudió la estabilidad térmica de las proteínas en medios de PEG por espectrofotometría y por calorimetría diferencial de barrido observándose aumento de las temperaturas de equilibrio de las formas nativas y desnaturalizadas de las proteínas en presencia de PEG y aumento del calor involucrado en la desnaturalización proteica en presencia del polímero. Podría concluirse que se evidencia la presencia de una importante interacción PEG-proteína que lleva a un estado final termodinámico mas estable. Estos resultados están de acuerdo con los elevados coeficientes de reparto a favor de la fase rica en PEG, encontrados en trabajos previos.