BIOSINTESIS DE 15N-UREA INDUCIDA POR GLUCAGON EN HEPATOCITOS DE RATA CON KNOCKDOWN DE AQUAPORINA-8 MITOCONDRIAL

SORIA LR; TABORDA DR; MARINELLI RA

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2011

Sociedad Argentina de Fisiologia

La  destoxificaci¨®n  del  amon¨ªaco  ocurre  en  el  h¨ªgado,  princi-palmente a nivel mitocondrial por ureag¨¦nesis. Estudios previos, en animal entero y cultivo primario de hepatocitos, sugieren que la  Aquaporina-8  mitocondrial  (mtAQP8)  facilitar¨ªa  la  difusi¨®n  del amon¨ªaco  abasteciendo  el  ciclo  de  la  urea.  Objetivo:  evaluar  la producci¨®n de 15N-Urea a partir de 15NH4Cl en hepatocitos con knockdown de mtAQP8. Metodolog¨ªa y Resultados: Hepatocitos controles y con expresi¨®n disminuida de mtAQP8 (-80 ¡À 10 %; p < 0,05; n=4) fueron incubados con 15NH4Cl (1 mM) y estimulados a sintetizar urea al ser expuestos a la hormona glucagon (1 ¦ÌM) por 4 h. La aparici¨®n de 15N-Urea se determin¨® por Resonancia Magn¨¦tica Nuclear. Los hepatocitos con knockdown de mtAQP8 mostraron  una  disminuci¨®n  significativa  (-85  ¡À  2  %;  p  <  0,05; n=4)  en  la  inducci¨®n  de  la  s¨ªntesis  de  15N-urea  estimulada  por glucagon. Por otro lado, el knockdown de mtAQP8 no alter¨® signi-ficativamente la expresi¨®n de las enzimas mitocondriales del ciclo de la urea: CPS1 y OTC, ni de la ATP sintetasa mitocondrial. El contenido de ATP celular se mantuvo estable entre los grupos en estudio. Tampoco result¨® comprometida la viabilidad celular, eva-luada por determinaci¨®n de la actividad succinato deshidrogenasa mitocondrial (ensayo MTT), as¨ª como por la liberaci¨®n de la enzima citos¨®lica  LDH.  Conclusi¨®n:  La  disminuci¨®n  en  la  bios¨ªntesis  de 15N-Urea en hepatocitos con knockdown de mtAQP8 representa una evidencia directa que vincula a la AQP8 como transportador mitocondrial de amon¨ªaco en el proceso de ureag¨¦nesis hep¨¢tica.La  destoxificaci¨®n  del  amon¨ªaco  ocurre  en  el  h¨ªgado,  princi-palmente a nivel mitocondrial por ureag¨¦nesis. Estudios previos, en animal entero y cultivo primario de hepatocitos, sugieren que la  Aquaporina-8  mitocondrial  (mtAQP8)  facilitar¨ªa  la  difusi¨®n  del amon¨ªaco  abasteciendo  el  ciclo  de  la  urea.  Objetivo:  evaluar  la producci¨®n de 15N-Urea a partir de 15NH4Cl en hepatocitos con knockdown de mtAQP8. Metodolog¨ªa y Resultados: Hepatocitos controles y con expresi¨®n disminuida de mtAQP8 (-80 ¡À 10 %; p < 0,05; n=4) fueron incubados con 15NH4Cl (1 mM) y estimulados a sintetizar urea al ser expuestos a la hormona glucagon (1 ¦ÌM) por 4 h. La aparici¨®n de 15N-Urea se determin¨® por Resonancia Magn¨¦tica Nuclear. Los hepatocitos con knockdown de mtAQP8 mostraron  una  disminuci¨®n  significativa  (-85  ¡À  2  %;  p  <  0,05; n=4)  en  la  inducci¨®n  de  la  s¨ªntesis  de  15N-urea  estimulada  por glucagon. Por otro lado, el knockdown de mtAQP8 no alter¨® signi-ficativamente la expresi¨®n de las enzimas mitocondriales del ciclo de la urea: CPS1 y OTC, ni de la ATP sintetasa mitocondrial. El contenido de ATP celular se mantuvo estable entre los grupos en estudio. Tampoco result¨® comprometida la viabilidad celular, eva-luada por determinaci¨®n de la actividad succinato deshidrogenasa mitocondrial (ensayo MTT), as¨ª como por la liberaci¨®n de la enzima citos¨®lica  LDH.  Conclusi¨®n:  La  disminuci¨®n  en  la  bios¨ªntesis  de 15N-Urea en hepatocitos con knockdown de mtAQP8 representa una evidencia directa que vincula a la AQP8 como transportador mitocondrial de amon¨ªaco en el proceso de ureag¨¦nesis hep¨¢tica.