El knockdown de la expresión de aquaporina-8 mitocondrial (AQP8mt) disminuye la excreción de NH4+ en células del túbulo proximal renal humano

MOLINAS S; BONFILS A; TRUMPER L; MARINELLI RA

Mar del Plata

Congreso; Reunion Anual Sociedad Argentina de Fisiología; 2011

Sociedad Argentina de Fisiología

En trabajos anteriores mostramos que la línea celular HK2 (derivada de epitelio de túbulo proximal renal humano) responde ante la acidosis produciendo y excretando una mayor cantidad de NH4+. Esta incrementada excreción de NH4+ se encontró asociada a un aumento de la expresión de AQP8mt. Dado que AQP8 facilita el transporte difusivo transmembrana de NH3/NH4+ y se localiza en membrana interna mitocondrial de las células proximales, nuestra hipótesis supone que AQP8mt participaría en la salida mitocondrial del NH3/NH4+. El objetivo del presente trabajo fue evaluar los efectos de una expresión defectiva de AQP8mt sobre la excreción de NH4+ en células HK2 en condiciones basales y en respuesta a la acidosis. El knockdown de la expresión de AQP8mt (AQP8mt-) se realizó mediante la transfección con ARN de interferencia (ARNi) específico para AQP8 humana. Como control (C) se usó ARNi no específico conteniendo los nucleótidos en secuencia irregular. El análisis por inmunobloting indicó que después de 48 h de transfección, las fracciones enriquecidas en mitocondrias mostraron una disminución del 60 % en la expresión de AQP8mt. En el medio de cultivo se observó una menor acumulación de NH4+ (C= 2,36 ± 0,14; AQP8mt- = 1,63 ± 0,12, μmol NH4+/μg proteína, p<0,05, n=6). La viabilidad celular (evaluada por la liberación de LDH) no se encontró afectada. Una vez establecido el knockdown, las células fueron expuestas durante 24 h a un medio ácido (pH 6,9). Se observó una disminución de la acumulación de NH4+ en las células silenciadas (C= 3,86 ± 0,15; AQP8mt- = 1,60 ± 0,29, μmol NH4+/μg proteína, p<0,05, n=6). Estos resultados sugieren que la AQP8mt está involucrada en la respuesta a la acidosis de las células proximales humanas, posiblemente facilitando el transporte mitocondrial del NH3/NH4+.