LAS PROTEÍNAS QUINASAS ACTIVADAS POR MITÓGENO (MAPKs) MEDIAN LA ALTERACIÓN SECRETORA BILIAR INDUCIDA POR ESTRADIOL 17BETA-D-GLUCURÓNIDO (E217G).

BOAGLIO, ANDREA C.; ZUCCHETTI, ANDRÉS E.; TOLEDO FLAVIA D.; BAROSSO, ISMAEL R.; CROCENZI, FERNANDO A.; ROMA, MARCELO G.

Buenos Aires

Congreso; AAEEH; 2011

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado

Introducción y Objetivos: En estudios previos, demostramos que el agente colestásico E217G induce alteraciones en la función y localización de los transportadores canaliculares responsables de la formación de bilis Bsep y Mrp2, vía activación de proteínas quinasa C dependientes de Ca2+ (cPKC) (Hepatology 48: 1885-95), y que los transportadores endocitados son retenidos vía la simultánea activación de fosfoinositosido 3 quinasa (PI3K) (Hepatology 52: 1465-76, 2010). Dado que se ha descripto que tanto cPKC como PI3K regulan la actividad MAPK, indagamos la posible mediación de diferentes isoformas de MAPKs (ERK 1/2 JNK y p38MAPK) en las alteraciones canaliculares inducidas por E217G en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHRs) y en hígados aislados y perfundidos de rata (HAPRs).Resultados: E217G activó todos los tipos de MAPKs, indicado por un aumento del grado de autofosforilación de sus isoformas por Western blotting. La cuantificación de la acumulación apical de sustratos fluorescentes de Bsep y Mrp2 por análisis digital de imágenes reveló que E217G (200 µM) disminuyó la capacidad de las DAHRs para secretar ápicalmente colil-lisil-fluoresceína (CLF; -59±2%, p<0.005) y glutation-metil-fluoresceína (GS-MF; -58±6%, p<0.005), sustratos respectivos de Bsep y Mrp2. Los inhibidores selectivos de MAPKs del tipo ERK 1/2 (PD098059, 50 mM) y del tipo p38MAPK (SB203580, 1 µM) previnieron parcialmente estas alteraciones (PD098059: CLF: +57±7%, GS-MF: +51±13%; SB203580: CLF: +43±7%, GS-MF: +68±4; % >200 duplas en cada grupo, n=3-4, p<0.05 vs. E217G). En cambio, el inhibidor de JNK (SP600125, 1 µM) no tuvo efecto alguno. Inmunomarcación seguida de microscopía confocal revelaron que E217G indujo una extensa internalización de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con los inhibidores de ERK 1/2 y p38MAPK, a las dosis empleadas en los estudios de funcionalidad, previnieron parcial pero significativamente estas alteraciones (p<0.05). El efecto protector de los inhibidores de E1/2y p38MAPK fue aún mayor que aquel inducido por el inhibidor de PI3K wortmanina (100 nM) y por el inhibidor de cPKC Gö6986 (1 µM), sugiriendo y MAPK actúan, al menos parcialmente, como una vía independientes que PI3K/cPKC. En hígado aislado y perfundido, E217G (2 µmol) redujo significativamente el flujo biliar (-69±14%, p<0.001), y el inhibidor de p38MAPK SB203580 (1 µM) previno significativamente esta caída (+126±18%; p<0.001). Conclusión: Ls MAPKs del tipo ERK 1/2 y p38MAPK participan en la alteración de la función secretora biliar inducida por E217G, promoviendo internalización endocítica de transportadores canaliculares.