Purificación y Marcación de Anticuerpos

ARGÜELLES MARCELO; CARBAJAL MARIA LAURA

2017-07-17/2018-03-15

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Biológica

Tecnologia sanitaria y curativa-Varios

La Purificación la llevo a cabo el Lic. M. Arguelles. La Marcación de IgG con FITC, la Dra. M.L. Carbajal. La elaboración del informe asi como las tareas correspondientes, fue realizada por ambos (50 % cada uno). La Marcación con FITC se realizó sobre dos tipos de muestras de anticuerpos: A) IgG α-BL6, 3,2 mg/ml y B) IgG comercial anti alfa-FSH, 0,1 mg/ml. Para el caso de A) IgG α-BL6: 1) requiere cambio de buffer a las condiciones de marcación por Exclusión Molecular, según protocolo del proveedor; 2) MARCACIÓN de PROTEINAS con Isotiocianato de Fluoresceína (FITC), según protocolo del proveedor; 3) RECUPERACIÓN de IgG-FITC por Exclusión Molecular, según protocolo del proveedor en buffer PBS. Presentación: alicuotas de 1 ml conteniendo 1,5 mg/ml de IgG, 1,012.10^9 RFU/ml. B) IgG comercial, contiene Gelatina y Azida (inhibidores de la reacción de marcación) pero la muestra es insuficiente para realizar una diálisis o exclusión molecular. Se propone: 1) ajuste a pH de reacción con adición de buffer de reacción concentrado; 2) MARCACIÓN de PROTEINAS con Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) según protocolo del proveedor; 3) RECUPERACIÓN de IgG-FITC por cromatografía de afinidad con Proteína A, según protocolo del proveedor; 4) Concentración de todas las fracciones obtenidas en la elución por filtración por centrifugación por medio de Centricom®.