Desarrollo de métodos para el diagnóstico rápido de patologías virales.

ARGÜELLES M.; FLORES C.; GLIKMANN G.; MANDILE, M.; AGUIAR C.; GRASSELLI, M.; PERI IBAÑEZ E.; TEMPRANA, C.F.; SILVESTRE D.; CASTELLO A.A.; ARGÜELLES M.; FLORES C.; GLIKMANN G.; MANDILE, M.; AGUIAR C.; GRASSELLI, M.; PERI IBAÑEZ E.; TEMPRANA, C.F.; SILVESTRE D.; CASTELLO A.A.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; Exposición y Congreso Internacional de Farmacia y Bioquímica Industrial (EXPOFYBI).; 2019

Introducción:El presente trabajo está encuadrado en una línea general de I + D llevada a cabo en la Unidad de Transferencia Tecnológica en Inmunología, Procesos y Producción de Biológicos (UTTIPP), de la Plataforma de Servicios Biotecnológicos (PSB), en la Universidad Nacional de Quilmes (UNQ), conformada por el Laboratorio de Inmunología y Virología (LIV) y el Laboratorio de Materiales Biotecnológicos (LaMaBio) de dicha universidad. Esta línea se orienta al desarrollo de metodologías de detección y caracterización de patógenos virales y, en particular, esta presentación se orienta a técnicas útiles para el diagnóstico rápido, factible de utilizarse en servicios de salud con bajo o nulo equipamiento y ejecutado por personal sin entrenamiento. Si bien existen pruebas de este tipo disponibles comercialmente, la mayoría deben ser importadas, limitando su acceso, en especial para el sistema público de salud. Nuestra unidad pretende reducir estas limitantes gracias a su capacidad de generación de productos biológicos purificados y materiales especiales logrando, al mismo tiempo, intensificar la vinculación y transferencia al sector productivo, lo que podría constituir el primer paso de una sustitución de importaciones.Se desarrollaron dos prototipos de metodología de diagnóstico rápido, una inmunocromatografía de flujo lateral (ICFL) y una inmunofiltración (IF) para la detección de Rotavirus del grupo A (RVA) y nos hallamos en etapas más tempranas de similares metodologías para la detección de Virus sincicial respiratorio (VSR) y Dengue-1 (DENV-1).Materiales y Métodos:El prototipo de metodología de IF se basó en el uso de membranas track-etched de PET (tereftalato de polietileno) (TEMs), un material nanoestructurado disponible comercialmente, modificado en la UTTIPP para obtener poros perfectos de un tamaño y densidad definidos. Para el prototipo de ICFL se utilizaron membranas comerciales de nitrocelulosa. En ambos casos se utilizaron anticuerpos de producción propia conjugados a nanopartículas de oro (AuNPs) sintetizadas en UTTIPP.Se evaluaron distintas condiciones de reacción y reactantes, modificando buffers, aditivos y distintas preparaciones de anticuerpos. Se testearon ambos prototipos con muestras clínicas de nuestra colección. Además, se llevó a cabo la validación de la ICFL, y la comparación de performance contra un método similar de origen comercial y el ELISA de detección de RVA también desarrollado en la UTTIPP, cuyo desempeño es igual o superior a varios ELISAs comerciales.Resultados y Conclusiones:Para la IF se obtuvieron resultados satisfactorios en cuanto a sensibilidad y especificidad, comparables a los de la ICFL, para la detección de la mayoría de las muestras evaluadas. A pesar de los resultados favorables, es preciso seguir trabajando en el formato del ensayo, para poder llevar a cabo su validación con un número mayor de muestras clínicas. La ICFL mostró un 84% de sensibilidad y 100% de especificidad contra el ELISA de referencia, habiendo coincidido totalmente con el método comercial, y se ha fabricado y distribuido un número de kits en varios centros de salud, para una prueba de campo. Se continúa trabajando en una confección semi-automatizada que permita una producción a escala media.Como tareas de continuación de estos desarrollos, se evaluará el uso de nanopartículas de oro de mayor tamaño, con el fin de aumentar la sensibilidad de la ICFL. En el caso de la IF, se utilizarán membranas modificadas en la UTTIPP con grupos reactivos, con el mismo fin. Además de la detección de RVA por ambos métodos, hemos desarrollado un prototipo de ICFL exitoso para la detección de VSR cultivado in vitro y se está avanzando en la detección de este virus en muestras clínicas. Además, se encuentra en sus primeras etapas el desarrollo distintos prototipos de ICFL para la detección de DENV-1.