Estudio de las propiedades de agregación de ICA512- RESP18HD e insulina

LLOVERA, RAMIRO E.; ERMÁCORA, MARIO R.; TOLEDO, PAMELA L.; MÜLLER ANDREAS; TORKKO, JUHA M.; SOLIMENA, MICHELE

Quilmes

Jornada; 3ra Reunión de Jóvenes Investigadores de Ciencia y Tecnología; 2018

ICA512/IA?2/PTPRN es una tirosina fosfata inactiva que se encuentra principalmente en los gránulos secretorios (GS) de las células β-pancreáticas y otras células neuroendocrinas. Resultados anteriores demostraron su participación en la biogénesis, transporte y exocitosis de los GSs de insulina como así también en la proliferación de las células-β. En la región extracelular de ICA 512, se encuentra el dominio RESP18HD (del inglés glucocorticoid-responsive regulated endocrine-specific protein 18 homologous domain). RESP18HD está compuesto por el péptido señal de traslocación al retículo endoplásmico (aa 1-34), el motivo N-terminal rico en cisteínas motif (aa 35-90) y una región intrínsecamente desordenada en la parte C-terminal del dominio (aa 91-131). Se sabe que RESP18HD es necesario y suficiente para dirigir a ICA512 a los GS en células INS- 1 de insulinoma de rata y se une con gran afinidad a insulina y pro-insulina. En trabajos anteriores hemos observado la formación de complejos RESP18HD e insulina demostrando su co-agregación in vitro. El objetivo de este trabajo es profundizar el estudio biofísico de dicha interacción. Dentro de los principales resultados, la tinciones negativas de microscopía electrónica (ME) mostraron que los complejos de insulina y RESP18HD son amorfos y no siguen un patrón regular. También hemos observado por microscopía de fluorescencia de RESP18HD fusionado a turquise (RESP18HD-TQ2) que el motivo rico en cisteinas (1-90) contien suficiente información para producir el direccionamiento a lo SG. Además, hemos comprobado mediante FLIM-FRET (Fluorescence lifetime imaging-fluorescence resonance energy transfer) una interacción moderada entres RESP18HD e insulina también en células. Estos resultados son consistentes con la hipótesis de que la interacción de ICA512-RESP18HD con insulina (y posiblemente otras proteínas de los GS) puede contribuir biogénesis eficiente de SG.