Proteoma de las Gotas Lipídicas Nucleares

VES-LOSADA, A; LAGRUTTA, LC; TREJO, SA

San Luis

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2017

En el núcleo de las células eucarióticas, loslípidos neutros se organizan y compartimentalizan en una pequeña población deGotas lipídicas (nLD) construidas por tres pequeñas LD que representan el 10%de las poblaciones celulares de LD (nLD + cLD: LD citosólicas).Las nLD estarían involucradas en la homeostasislipídica, y en el interior nuclear servirían como un sistema buffer capaz deaportar o incorporar en forma rápida proteínas y lípidos involucrados en víasde señalización, aportando ligandos (FA, DAG, etc.) para factores detranscripción, sustratos, y enzimas del metabolismo lipídico y de otrosprocesos que se desarrollan dentro del núcleo.Las nLD, están constituidas por un core hidrofóbicode triacilglicéridos (TAG) y esteres de colesterol (CE), rodeado de unamonocapa de lípidos polares (LP), colesterol (C) y proteínas asociadas. Los LP nuclearesparticipan activamente como segundos mensajeros en diferentes vías deseñalización que involucraran a glicerofosfolípidos (GPL) y esfingolípidos (SL).LosLP nucleares se caracterizan por contener mayoritariamente 20:4n-6 y 18:0,mientras que los LN 16:0, 16:1n-7, 18:2n-6 y 18:1n-9 (AO) esterificados en susmoléculas. Previamente hemos demostrado que las nLD son un organoide celulardinámico, inducido reversiblemente por AO que requiere de la biosíntesis encurso de TAG, CE y PL, y determina cambios morfológicos coordinados entre laspoblaciones celulares de LD (nLD y cLD).El objetivo de este trabajo fue comenzar adilucidar las funciones celulares de las nLD, su metabolismo y su organizaciónestructural. Se utilizó como herramienta experimental el análisis de laproteómica de las nLD por GeLC-MS en condiciones fisiológicas y no patológicasa partir de una fracción aislada de las nLD de hígado de rata.En una primera etapa se desarrolló unprotocolo experimental que permitió concentrar y aislar a las proteínas de lasnLD, teniendo en cuenta que son un componente celular minoritario (0,0004%) yque se aíslan en una banda de un gradiente de sacarosa en la que las LD están muydiluidas. El protocolo incluyó la eliminación en la muestra de losinterferentes con el análisis de proteómica, como la sacarosa (proveniente delos gradientes) y los LN que son moléculas hidrofóbicas y además loscomponentes mayoritarios de las LD.En estas condiciones experimentales seidentificaron 35 proteínas, y se clasificaron en las siguientes categoríasfuncionales: Citoesqueleto y Estructurales (50%), Factores de transcripción(23%), Plegado de proteínas y modificaciones postraduccionales (9%),Proliferación celular y cáncer (9%), Metabolismo lipídico (6%) y Transporte(3%). En conclusión, estos son los primeros resultados de laproteómica de las nLD y demuestran que el protocolo desarrollado permite elestudio por GeLC-MS. Hay una gran diversidad en las funciones celulares de lasproteínas identificadas y las nLD estarían involucradas directamente oindirectamente en dichos procesos.