Caracterización del Exon 4 en el Gen ASIP y su asociación con el color de capa en llamas argentinas

DAVERIO MS, DI ROCCO F, RIGALT F, ROMERO S, ARBELETCHE VIDAL RIOJA L

Arica

Congreso; VI Congreso Mundial de Camelidos Sudamericanos; 2012

Universidad dwe Chile

CARACTERIZACIÓN DEL EXÓN 4 EN EL GEN ASIP Y SU ASOCIACIÓN CON EL COLOR DE CAPA EN LLAMAS ARGENTINAS (Characterization of Exon 4 of ASIP gene and its association with coat color in Argentinean llamas) Daverio, M.S.1, Di Rocco, F.1, Rigalt, F.2, Romero, S.3, Vidal Rioja, L.1 1Instituto Multidisciplinario de Biología Celular (IMBICE), CIC-PBA, CCT-CONICET, Calle 526 e/ 10 y 11, CP(1900), La Plata, Buenos Aires. 2EEA, INTA-Catamarca, Catamarca. 3EEA Abra Pampa, INTA-Jujuy, Jujuy. Argentina. m.sil.daverio@outlook.com Introducción: En mamíferos, las variaciones en los patrones de color de capa dependen de varios genes. Entre ellos, la unión del Receptor 1 de Melanocortina (MC1R) a su ligando, la hormona alfa-melanocito estimulante (α-MHS), regula la producción de eumelanina (marrón y negro) mientras que la interacción del MC1R y su antagonista ASIP (péptido de señalización Agouti), produce pigmentos feomelánicos (rojo-amarillento). En la llama existe escasa información acerca de los genes involucrados en la determinación del color de capa. Recientemente, Daverio MS et al. (2012) identificaron variantes alélicas del gen MC1R y su asociación con la presencia/ausencia de color en llamas(1). El objetivo del presente estudio es caracterizar el Exón 4 del gen ASIP y determinar si existe asociación entre sus alelos con el color de capa en llamas. Materiales y Métodos: Se extrajo ADN genómico de sangre entera de 73 llamas procedentes de las provincias argentinas de Entre Ríos, Jujuy y Catamarca las que se agruparon por color de capa en: blanco no albino (BNA), marrón oscuro y negro (MO), marrón claro (MC) y marrón rojizo con cara y extremidades negras (MCN). Mediante PCR se amplificó el Exón 4 del gen ASIP, utilizando un par de primers diseñados sobre la secuencia del genoma completo de la alpaca depositado en la base de datos Ensembl, con el programa Primer3 v0.4.0. La tipificación de los animales se realizó en geles de agarosa al 2% teñidos con GelRedTM. Para corroborar el tamaño de la deleción del Exón 4, se purificaron 10 muestras (5 homocigotos para la inserción y 5 homocigotos para la deleción) y se secuenciaron. El alineamiento de las secuencias y análisis de polimorfimos de nucleótidos simples (SNPs) se realizó con el programa Geneious v5.6. La asociación entre el color y la deleción del Exón 4 se llevó a cabo mediante el Test exacto de Fisher. Resultados y Discusión: El Exón 4 del gen ASIP de llama tiene 177pb. Presentó un único SNP (C/T) y el perfil electroforético mostró la existencia de dos bandas con distinto peso molecular correspondiente a un polimorfismo inserción/deleción (INDEL) de 57pb que también han sido reportados en alpaca(2). Se estudió la asociación entre los diferentes colores de capa y el INDEL. Los animales del grupo MCN y BNA presentaron los tres genotipos posibles (homocigotos para la inserción, heterocigotos y homocigotos para la deleción) descartándose de esa manera la asociación entre el INDEL y el color estudiado. Sin embargo, los animales del grupo MC fueron homocigotos para la inserción o heterocigotos mientras que en el grupo MO se observaron individuos homocigotos para la deleción o heterocigotos. La asociación entre el color marrón claro y la inserción, asi como también, el color marrón oscuro y la deleción, resultaron significativas (Test de Fisher P<0,0001). Estudios de segregación mediante genética clásica realizados previamente en llamas, mostraron que la herencia del fenotipo marrón claro es dominante con respecto al marrón oscuro(3), por lo que el alelo delecionado sería el recesivo. Conclusión: La presencia o ausencia de la deleción del Exón 4 del gen ASIP cumple un rol importante en la determinación de los fenotipos eumelánicos y feomelánicos. Referencias: Daverio MS, Di Rocco F, Vidal Rioja L. Identification of allelic variants in Melanocortin-1 receptor gene in llama (Lama glama). Abstract book: 33rd Conference of the International Society for Animal Genetics. Cairns, Australia; 2012.p. 73-74. Feeley NL, Bottomley S, Munyard KA. Three novel mutations in ASIP associated with black fibre in alpacas (Vicugna pacos). J Agric Sci. 2011; 149: 529-538. Frank EN, Hick MVH, Gauna CD, Lamas HE, Reniere C, Antonini M. Phenotypic and genetic description of fibre traits in South American domestic camelids (llamas and alpacas). Small Ruminant Res. 2006; 61: 113-129