DETECCIÓN DE LAS MUTACIONES TKD Y DIT EN EL GEN FLT3 Y SU ASOCIACIÓN CON PARÁMETROS CLÍNICOS ALTERADOS EN PACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA

CAMACHO MF; BESTACH Y; LARRIPA I; CARLA ORELLANA; BELLI C

Mendoza

Congreso; XXIV Congreso Argentino de Hematologia; 2019

Soc. Arg. de Hematologia

IntroducciónEl gen FLT3 codifica para un receptor de membrana con función de tirosina kinasa (TK) clase III y puede presentar 2 tipos de mutaciones: las DIT (Duplicación interna en tándem) en el dominio yuxtamembrana y las TKD (por sus siglas en inglés) en el dominio TK. Estas mutaciones se observan en, aproximadamente, el 30% de los pacientes con Leucemia Mieloide Aguda (LMA) y dan lugar a su activación independiente del ligando, estimulando la renovación, sobrevida y proliferación celular. Varios estudios han asociado la presencia de estas mutaciones con un peor pronóstico en pacientes con LMA.ObjetivosDeterminar la presencia de mutaciones TKD y DIT en el gen FLT3 y su asociación con parámetros clínicos alterados en pacientes con Leucemia Mieloide Aguda de reciente diagnóstico.Material y métodosSe analizó un total de 147 muestras provenientes de pacientes adultos con LMA al momento del diagnóstico entre May-18 a Jun-19. La extracción de ADN se realizó utilizando columnas comerciales, y se partió de la fracción de células mononucleares enriquecidas mediante gradiente de densidad (Ficoll-PaqueTM Plus). La detección de la DIT se efectuó realizando amplificación por PCR, visualización en gel de agarosa y posterior análisis de fragmentos mediante electroforesis capilar a fin de calcular el ratio entre el alelo mutado respecto del salvaje. Para la detección de TKD, se realizó PCR-RFLP confirmada mediante secuenciación automática.ResultadosLos pacientes presentaron una relación de sexo Fem/Masc (76/71) de 1,1, con una mediana (Mdn) de edad de 52,5 años (rango 18-82), el 76,3% presentó LDH elevada. Una Mdn de glóbulos blancos (GB) de 19650/µL (rango 800-360000) y una Mdn de 70% de blastos (rango 20-100). Se identificaron 44 (29,9%) pacientes portadores de mutaciones FLT3(+): 30 DIT(+), 9 TKD(+) y 5 DIT(+)/TKD(+). Dentro del grupo FLT3(+) se observó un predominio de mujeres (68,2%) vs 31,8% de varones (Test exacto de Fisher, p=0,0115). Comparando los pacientes FLT3(+) respecto de los FLT3(-), los primeros presentaron mayores recuentos de GB (Mdn 74250 vs 11000/µL, Mann-WhitneyU, pC (11,1%) dando lugar a p.Asp835His; 1 c.2502_2504delAGA, originando p.Asp835del, y 1 c.2504_2508delATATCinsTT correspondiente a p.Asp835_Ile836delinsVal. Estas últimas variantes sin antecedentes en las bases de datos consultadas.ConclusionesNuestros resultados reflejan una frecuencia de mutaciones en FLT3 del 30%, con un predominio de DIT en comparación con las TKD, coincidentes con los datos de la literatura. La detección por PCR y electroforesis capilar permite resultados de alta sensibilidad y especificidad. El rango de las duplicaciones y las variantes de secuencia encontradas en TKD se corresponden con lo publicado. Los pacientes FLT3(+) presentaron mayor frecuencia de altos recuentos de GB y sexo femenino.