Expresión en Lactococcus lactis de un antígeno no tóxico derivado de Toxina Shiga 2 (Stx2).

MEJIAS MP; BENTANCOR LV; HOLLMANN A; PANEK CA; RAMOS, MV; FERNÁNDEZ BRANDO, RJ; GHIRINGHELLI P; PALERMO, MS

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), LVII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI).; 2009

Sociedad Argentina de Inmunología - Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La infección con Escherichia coli productor de Stx2 causa colitis hemorrágica y puede complicarse en la forma de Síndrome Urémico Hemolítico (SUH), el cual es un desorden multisistémico caracterizado por presentar anemia hemolítica microangiopática, trombocitopenia, e insuficiencia renal aguda. En Argentina, El SUH es endémico y presenta la mayor incidencia del mundo. Las vacunas experimentales ensayadas contra el SUH no fueron efectivas debido, en parte, a que la subunidad B tiene bajo potencial inmunoprofiláctico y la subunidad A es tóxica. L. lactis es una bacteria del ácido láctico (BAL) no patogénica, no invasiva y no colonizadora que posee status GRAS (Generally Recognized As Safe). Este microorganismo es considerado el modelo de BAL y un excelente candidato para el desarrollo de vacunas vivas para inducir inmunidad en mucosas.             En este trabajo se clonó la subunidad B de Stx2 (Stx2b, principal factor patogénico asociado a SUH) en un vector para la expresión citoplasmática inducible por xilosa (pXYCYT-stx2b). Luego, se transformó este vector en la cepa L. lactis NCDO2118 y los cultivos se indujeron a DO600 = 0.2 y se incubaron 20 hs sin agitación. Se inocularon por via intragástrica ratones BALB/c adultos con 109 UFC utilizando dos protocolos de inmunización alternativos (0, 1, 2, 28, 29, 30, 35 días y 0, 7, 14, 21, 56, 57, 58 días). Se recolectó suero y materia fecal a distintos tiempos para determinar el título de anticuerpos específicos. Sin embargo, en suero no se obtuvieron diferencias significativas entre la respuesta generada con L. lactis conteniendo pXYCYT-stx2b y la cepa control. Por esta razón, se analizó la expresión de Stx2b a distintos tiempos post inducción mediante dot blot, observándose una disminución significativa en la expresión luego de las 4 hs de cultivo. Estos resultados indican que probablemente luego de 20 hs de inducción stx2b se esté expresando en cantidades insuficientes para generar una respuesta inmune eficiente.