Correlacion entre la respuesta molecular con los niveles del clon mutado en LMC resistente a los inhibidores de 2da generacion. Analisis de una base de datos

BIANCHINI M; CATALAN M; MOIRAGHI B; BENGIO R; ALÚ MF, BELLI C, ALFONSO G, SAKAMOTO J, LARRIPA I; PINTOS E; FREITAS J; ANCHORDOQUI S; FERRI C; CANONICO V; ENRICO A

Mar del Plata

Congreso; XXIII Congreso Argentino de Hematologia; 2017

Sociedad Argentina de Hematología

Introducción: Los inhibidores de tirosina kinasa (ITKs), en especial de 2da generación, son potentes inductores de respuestas moleculares profundas o indetectables por métodos de cuantificación en escala internacional que están disponibles en Argentina.Los casos de fallo o pérdida de las respuestas en LMC Fase Crónica representan un 30-40% y un 50-60% en Fase Acelerada o Crisis Blástica. Las mutaciones son la causa más frecuente de resistencia a ITKs y han sido las más estudiadas. La detección de mutaciones en pacientes resistentes es de importancia y según la identificación de las mismas se puede efectuar un cambio más racional entre los ITKs disponibles: Nilotinib, Dasatinib, Ponatinib. Numerosas publicaciones demostraron que las mutaciones en P-loop confieren una evolución poco favorable y la T315I una fuerte resistencia a la mayoría de los ITKs. Datos recientes de la literatura indican que la detección aislada de subclones BCR/ABL1 mutados no permite predecir su dinámica de expansión y su potencial persistencia. Por lo mencionado, la cuantificación del clon (es) mutado(s) sí podría prever las características de evolución de estos casos. Otros trabajos mostaron variable correlación entre la proporción de clon mutado con los porcentajes de BCR-ABL1 (respuestas moleculares).Se evaluó la base de datos del Estudio de Mutaciones realizado en IIHEMA desde 2012 hasta la actualidad, que contiene casuística aportada por nuestra Institución y diversos centros hematológicos de Argentina.Objetivo: Establecer en casos que desarrollaron mutaciones la correlación entre los niveles de transcriptos BCR-ABL1 con el porcentaje del clon mutado y su implicancia clínica.Material y Métodos: Se seleccionaron 21 casos con mutaciones en el dominio kinasa del ABL de 75 evaluables. Las mutaciones fueron detectadas mediante secuenciación directa (Met. Sanger) y las mismas fueron cuantificadas por PCR alelo especifica (ARMS).En todas las muestras se realizó Q-RT-PCR en escala internacional para evaluar el porcentaje de los transcriptos BCR-ABL1.Resultados: Las mutaciones detectadas fueron: 11 en el dominio imatinib binding (6 T315I, 3 V299L y 2 F317L), 4 en el P-loop (G250E, E255K, E255V e Y253H), 3 en el A-Lopp (F359I, F359V y E355K) y 3 casos con mutaciones múltiples, caso 1: F317L-Q252H; caso2: G250E-M244V-L248M-Q252H y caso 3: E355G-F359V. Las respuestas moleculares obtenidas en los 21 casos evaluados fueron: RMNula en 10, RMMin en 8y RMMenor en 3.Se analizó el porcentaje de cada uno de los clones mutados en relación al tipo de respuesta molecular. Las medianas de los clones mutados fueron 68%, 51% y 15% para los casos con RMNula, RMMin y RMMe respectivamente. Estos valores muestran diferencias estadísticamente significativas (p< 0,024) (test de Kruskal Wallis). Seis pacientes fallecieron por evolución de enfermedad, 1 paciente se perdió al seguimiento y los 14 restantes se encuentran en fase crónica y con respuesta molecular variable.Conclusiones: Nuestros datos muestran que en los pacientes resistentes a la segunda línea de tratamiento con ITKs de segunda generación, las mutaciones más frecuentemente detectadas fueron las del imatinib binding entre ellas la T315I y la V299L, Además se encontraron 3 pacientes con mutaciones múltiples indicando evolución clonal. Si bien todos los casos estudiados presentaban manifestaciones de resistencia al tratamiento, la respuesta molecular fue variable: RMMenor, RMMin ó RMNula. La cuantificación de las mutaciones detectadas mediante una PCR alelo específica permitió determinar los porcentajes de los subclones mutados, los cuales mostraron un incremento significativo en los casos con RMMin y Nula respecto al porcentaje en los pacientes con RMMenor. En el análisis de la evolución y sobrevida se constató que los pacientes fallecidos tenían RMNula con alto porcentaje de clon mutado. El estudio de detección y cuantificación de mutaciones demostró su utilidad para discriminar los casos de mayor riesgo de mortalidad.