INESTABILIDAD CROMOSÓMICA INDUCIDA POR ETOPÓSIDO EN CÉLULAS HUMANAS EN UN CONTEXTO DEFICIENTE EN ATM Y HR

SOLARI A ; BORDA MA, PALMITELLI M,; GONZÁLEZ CID M, LARRIPA I.

Buenos Aires

Exposici�n; XX Alexander Hollaender Course; 2016

Facultad de Farmacia y Bioquímica. UBA

El veneno de ADN-topoisomerasa II Etopósido (ETO) produce rupturas de doble cadena (RDC) persistentes y genera inestabilidad cromosómica. La proteína-quinasa ataxia-telangiectasia-mutated (ATM) se activa frente a las RDC y promueve la reparación de las mismas por recombinación homóloga (HR). Nuestro objetivo fue analizar la participación de ATM y HR en preservar la integridad cromosómica frente a las RDC inducidas por ETO en la fase G2 de células humanas. Se generaron líneas celulares HeLa Rad21kd (deficiente en cohesina que facilita HR) y NS (No-Silenciante, control) transfectando con shRNAmir. Las células se trataron con ETO 2μg/ml en presencia o no del inhibidor químico de ATM, KU55933 10µM. Se evaluaron las aberraciones cromosómicas (AC) estructurales en las metafases mitóticas a las 5-6 hs postratamiento y los micronúcleos (MN) en células binucleadas (obtenidas por citocalasina B) en la fase G1 posmitótica a las 10 hs postratamiento. ETO aumentó el porcentaje de células con AC en ambas líneas NS (13,6% vs. control 1,1%) y Rad21kd (36,9% vs. control 7,2%). El tratamiento combinado KU55933-ETO duplicó este porcentaje en relación al tratamiento con ETO (p