Caracterización de los neutrófilos en animales tolerantes al lipopolisacárido (LPS)

VERÓNICA I. LANDONI; PAULA CHIARELLA; GABRIELA BARRERA; EVANGELINA A. LABORDE; M. BÁRBARA REARTE; MARTÍN A. ISTURIZ; MARINA PALERMO; GABRIELA FERNANDEZ

La Falda - Córdoba - Argentina

Congreso; LVI reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

La respuesta inmune en los procesos sépticos muestra un patrón bimodal, con una activación explosiva del sistema inflamatorio seguido por un estado de refractariedad inmune. Los neutrófilos (PMN) son centrales en la defensa contra los patógenos y pueden modular la respuesta adaptativa. Aquí, caracterizamos PMN periféricos en un modelo murino que simula la fase de refractariedad inmune asociada a la sepsis, la tolerancia a lipopolisacáridos (LPS). Los ratones tolerantes se inyectaron diariamente por tres días con dosis bajas de LPS (5mg/ratón, Tol, n=22) y los controles con solución salina (Ctr, n=25). Una inyección adicional 24hs más tarde de una dosis alta de LPS fue administrada (100mg/ratón, desafío) a ambos  grupos (Ctr+LPS, n=16 y Tol+LPS, n=13). Distintos marcadores fueron determinados basalmente y 2hs luego del desafío por citometría de flujo. Los PMN de animales tolerantes presentaron un mayor tamaño y una menor expresión del marcador Gr-1 (FSC: Ctr=517±16, Tol=587±20*; Intensidad media de fluorescencia (IMF) Gr-1: Ctr=2970±736, Tol=2103±603*, *p<0.05 vs. Ctr). El desafío no modificó estos parámetros. Los tolerantes mostraron una expansión de una subpoblación de PMN  CD11blowCD62Lhigh, que disminuye pero se mantiene alta luego del desafío  (%CD11blowCD62Lhigh: Ctr=10.8±2.2, Tol=53.5±8.6*, Ctr+LPS=4.0±1.8, Tol+LPS=29.2±11.8*#, *p<0.05 vs. Ctr, #p<0.05 vs. Ctr+LPS). La expresión del CD11b en esta subpoblación fue similar entre los grupos, pero los PMN CD11bhighCD62Llow tolerantes mostraron una disminución del CD11b antes y después del desafío respecto de los controles (IMF: Ctr=150±9, Tol=116±6*, Ctr+LPS=332±114*†, Tol+LPS=146±16#†, *p<0.05 vs. Ctr, †p<0.05 vs. Tol, #p<0.05 vs. Ctr+LPS). Para determinar si los PMN de animales tolerantes eran capaces de modular la respuesta adaptativa, se determinó la proliferación por anti-CD3 adherido a placa de linfocitos normales (0.2x105) cocultivados con PMN (0.05x105) obtenidos de peritoneo de animales normales o tolerantes (n=6). La proliferación se determinó luego de 72hs con el colorante MTT. No se observaron diferencias en presencia de los PMN de los dos grupos (Abs. 500 mn: Ctr=0.78±0.04, Tol=0.74±0.05). Lo mismo se observó con PMN de periferia. Los PMN tolerantes muestran diferencias fenotípicas con respecto de los normales, y presentan una menor respuesta al desafío. Se observa una expansión de una subpoblación presumiblemente de precursores, pero que no modulan la proliferación de linfocitos.