TDP1 participa en la reparación de las lesiones genómicas generadas por Etopósido en células humanas

VERON G; PALMITELLI M; CIEZA I; GONZALEZ CID M; DE CAMPOS NEBEL M

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica. LXII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Inmunologia.; 2014

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica. Sociedad Argentina de Inmunologia.

La ADN Topoisomerasa II (Top2), enzima esencial para el metabolismo del ADN, es envenenada por agentes de amplio uso clínico como Etopósido (ETO). ETO estabiliza los complejos de clivaje Top2-ADN llevando a la formación de rupturas de doble cadena (DSB) persistentes en el ADN, que pueden ser reparadas por reunión de extremos no homólogos dependiente (C-NHEJ) o no (A-NHEJ) de DNA-PKcs. La enzima tirosil-ADN-fosfodiesterasa 1 (TDP1) remueve grupos fosfotirosilos de extremos 3? y 5? del ADN, e interacciona con factores de respuesta al daño genómico. Nuestro objetivo fue determinar si TDP1 afecta la señalización al daño por DSB inducidas por ETO y la reparación de las mismas. Se generaron líneas celulares humanas silenciadas en TDP1 (HeLa TDP1kd) y controles no silenciadas (HeLa NS) mediante secuencias shRNAmir. La señalización al daño se analizó por citometría de flujo y western blot. La eficiencia de reparación se estudió por la inducción de aberraciones cromosómicas en metafases y la formación de micronúcleos (MN) en células interfásicas. Los resultados mostraron que en respuesta a ETO (10µg/ml, 2hs), los niveles de expresión de pS1981ATM, pS2056DNA-PKcs, pS428ATR, γH2AX y pT68CHK2 no difieren entre ambas líneas celulares. Sin embargo, la activación de pS296CHK1 está aumentada en la línea TDP1kd (p