Caracterización de una deleción de 165 kb del F8 originada por recombinación no-homóloga causal de Hemofilia.

MIGUEL M. ABELLEYRO; LILIANA C. ROSSETTI; CLAUDIA P. RADIC; VANINA D. MARCHIONE; MIGUEL CANDELA; IRENE B. LARRIPA; CARLOS DANIEL DE BRASI

Bariloche

Congreso; XLIII Congreso Argentino de Genética (SAG). IV Reunión Regional SAG - La Pampa Patagonia, Bariloche, Argentina.; 2014

Sociedad Argentina de Genética

Las grandes deleciones del F8 representan el 8-15% de las hemofilias A severas (HAs) y predisponen al desarrollo de inhibidores terapéuticos, anticuerpos anti-factor VIII. Este trabajo presenta la caracterización molecular completa de una gran deleción del F8 detectada en un paciente con HAs e inhibidor de alto título (>5UB/dL) por ausencia consistente de amplificación del exón 3 al 26 (último exón del F8). Para identificar la región 3? de la deleción se diseñó un abordaje de análisis de acercamiento por bipartición: cinco amplímeros ubicados a 100, 50, 25, 12 y 6kb río-abajo del F8-exón 26 todos positivos en el paciente hemicigota. La amplificación PCR de larga distancia desde el F8-exón 2 hasta el producto de amplificación de 6Kb rindió una señal específica del alelo mutado de ≈4kb cuyo análisis de restricción múltiple y secuenciación permitió diseñar primers en el F8-IVS2 y F8+3,5kb para la amplificación PCR-estándar de la deleción para el diagnóstico molecular directo del paciente, su madre y dos hermanas. La secuenciación de este producto específico de 661bp permitió caracterizar una deleción de 165.297bp (ChrX:154226532-154061235), NM_000132.3:c.[265+1220_*4636del165297;265+1220_265+1221insAG]. Los extremos de la ruptura (F8-IVS2::F8+3,5kb) no presentan elementos repetidos interdispersos, ni repeticiones de pocas copias, indicando un mecanismo de recombinación no-homóloga por defectos en la reparación de rupturas por unión de extremos no-homólogos (NHEJ), o alternativamente, defectos en la replicación por Fork Stalling-Template Switching (FoSTeS).