La regulación de las respuestas plaquetarias gatilladas por ligandos de receptores tipo Toll (TLR) 2 y 4 desenmascara un nuevo rol no genómico del factor nuclear-kB

RIVADENEYRA, L; CARESTIA, A; ETULAIN, J; POZNER, RG; FONDEVILA, C; NEGROTTO, S; SCHATTNER, M

Mar del Plata

Congreso; 58 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) 2013; 2013

SAIC

Previamente demostramos que el factor nuclear-kappaB (NF-kB) es un mediador involucrado en la activación plaquetaria gatillada por agonistas clásicos. Dado que en células nucleadas la activación del NF-kB es una señal rioabajo en la transducción de la señal de los receptores tipo toll (TLRs) y que las plaquetas participan en la respuesta inmune en parte a través de la activación del TLR2 y 4, en el presente trabajo estudiamos el rol del NF-kB en la activación plaquetaria mediada por dichos receptores. La estimulación de plaquetas con Pam3CSK4 (Pam) o LPS, ligandos del TLR2 y 4 respectivamente, indujo la degradación del inhibidor (IkBα) y la fosforilación de la subunidad p65 del NF-kB (western blot). Ambas respuestas fueron inhibidas por anticuerpos bloqueantes de los TLRs y aumentadas por concentraciones subumbrales de trombina. Además, el Pam gatilló la agregación plaquetaria (turbidimetría), la unión del fibrinógeno (citofluorometría (CF); C:8±1, Pam:123±19 media de intensidad de fluorescencia, n=3), la liberación de ATP (luminiscencia; C:0±0,1, Pam:3,4±0,3uM, n=3) y del factor von Willebrand (FvW) (ELISA; 1,4±0,1 veces respecto del control (VdC), n=5), la expresión de P-selectina (CF; C:9±0,5, Pam:42±4,5%, n=5), la formación de agregados plaquetas-leucocitos (CF, C:16±2, Pam:38±3,6 %, n=5) y la expresión del CD40L (CF; C:1±0,1, Pam:25±6 % n=5). El LPS estimuló la liberación de FvW (1,7±0,2 VdC, n=5) y potenció la agregación y liberación de ATP inducida por trombina. Todas las respuestas fueron inhibidas por el tratamiento de las plaquetas con dos inhibidores estructuralmente no relacionados del NF-kB, Bay 11-7082 y Ro 106-9920. Estos datos sugieren que las respuestas inducidas por Pam o LPS en plaquetas son mediadas por el NF-kB, revelan otro rol no genómico del NF-kB en plaquetas e identifican a esta molécula como un potencial blanco para inhibir la activación plaquetaria en enfermedades infecciosas e inflamatorias