Efectos de la toxina Shiga tipo 2 (Stx2) sobre la diferenciación a y maduración de células dendríticas (CD) humanas derivadas de monocitos (Mo)

GABRIELA C. FERNÁNDEZ; MARÍA V. RAMOS; LETICIA V. BENTANCOR; ROMINA J. FERNÁNDEZ-BRANDO; MARTÍN A. ISTURIZ; MARINA S. PALERMO

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), LIV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2006

La Stx2 puede inducir una variedad de efectos desde la producción de citoquinas hasta la apoptosis por inhibición de la síntesis proteica. Aquí determinamos los efectos de la Stx2 sobre las CD. Las CD (CD14-) se obtuvieron por diferenciación con GM-CSF+IL-4 por 5 días a partir de Mo (CD14+) humanos purificados. Para estudiar los efectos sobre la diferenciación de las DC, las células fueron incubadas desde el día 1 con LPS (10ng/ml, control de inhibición de diferenciación), Stx2 (1mg/ml), o LPS+Stx2 por 48 hs, y la expresión del CD14 fue determinada por citometría de flujo. Si bien el LPS, solo o con la Stx2, inhibió el descenso del CD14, la Stx2 no causó variaciones en la expresión del CD14 (n=7, intensidad media de fluorescencia (IMF) CD14:Basal=62±7, LPS=443±71*, Stx2=70±12#, LPS+Stx2=473±123*†;*p<0.05 vs basal,#p<0.05vs LPS,†p<0.05 vs Stx2). El LPS indujo un aumento en el porcentaje de apoptosis de los Mo en vías de diferenciación, y los sensibilizó a los efectos proapoptóticos de la Stx2 (n=11, % apoptosis:Basal=31.0±3.2, LPS=41.1±2.8*, Stx2=33.7±3.4#, LPS+Stx2=53.4±3.9*#†;*p<0.05 vs basal,#p<0.05 vs LPS,†p<0.05 vs Stx2). Para determinar los efectos de la Stx2 sobre la maduración de las CD, las células fueron diferenciadas y en el día 5 incubadas 24hs con Stx2 (1mg/ml) o LPS (1mg/ml, control de maduración), y se midió la expresión de CD83 y HLA-DR (n=8) por citometría de flujo. El LPS, solo o con Stx2, indujo un aumento en el porcentaje de células CD83+ y en la expresión del HLA-DR, pero la Stx2 no causó variaciones en estos marcadores (% CD83:Basal=12±4, Stx2=15±5, LPS=28±5*†, LPS+Stx2=21±3*†; IMF HLA-DR:Basal=1258±115, Stx2=1322±108, LPS 1873±225*†, LPS+Stx2=1840±597*†; *p<0.05 vs basal,†p<0.05 vs Stx2). Además, la Stx2 no inhibió la síntesis proteica ni causó apoptosis en CD inmaduras. El LPS sensibiliza los Mo en vías de diferenciación a los efectos proapoptóticos de la Stx2, pero la Stx2 no afecta la diferenciación ni induce maduración de CD derivadas de Mo