Flagelina H7 (FH7) como componente vacunal para prevenir el síndrome urémico hemolítico (SUH)

MARÍA FLORENCIA TODERO; ROMINA JIMENA FERNÁNDEZ-BRANDO; MARINA SANDRA PALERMO; ALAN MAURO BERNAL; ALEXIA VEREERTBRUGGHEN; MÓNICA VERMEULEN; FERNANDO NICOLÁS SOSA; MARÍA VICTORIA RAMOS; MARTÍN RUMBO

Simposio; I Simposio Argentino sobre Escherichia coli productor de toxina Shiga responsable del Síndrome Urémico Hemolítico; 2022

Introducción y objetivos: Argentina presenta la mayor incidencia mundial de SUH asociado a bacterias Escherichia coli productoras de toxina Shiga (Stx; STEC) en niños menores de 5 años. La cepa STEC mayoritariamente asociada al SUH es E. coliO157:H7. Dada la importancia de la colonización intestinal de STEC en la patogénesis del SUH y el rol central que juega la respuesta humoral local para prevenir esta primera etapa, el objetivo de este trabajo fue analizar la capacidad de la FH7, monómeroestructural del flagelo bacteriano y proteína con alta capacidad inmunogénica, parainducir una respuesta local protectora. Materiales y métodos: se purificó la FH7 a partir de cepas STEC stx-, para reducir la exposición a la Stx durante el proceso y garantizar la ausencia de este importante factor de virulencia en la formulación. Se inmunizaron ratones BALB/c (n=5) con 3 dosis (10 µg/ratón), sin adyuvante, a intervalos de 10 díaspor vía intranasal para favorecer una respuesta local en intestino. La identidad de la proteína purificada se confirmó por Western Blot haciendo uso de un anticuerpocomercial anti-FH7 (abcam). A distintos días post tercera inmunización (dp3i), se tomaron muestras de materia fecal y suero para analizar los niveles de anticuerpos antiFH7 de isotipo IgG y/o IgA por ELISA. Para evaluar la respuesta celular se realizó a los 60 dp3i: 1) un ensayo de hipersensibilidad retardada (DTH) inoculando en la almohadilla plantar derecha de cada ratón 30 µl con 5 µg de FH7 y el mismo volumen de PBS en la izquierda, y se midió la diferencia de hinchazón a 72 hs (Δmm FH7-PBS). 2) un ensayo de proliferación celular frente a estímulo inespecífico (anti-CD3 10 µg/mL; anti-CD28 5 µg/mL) durante 5 días a partir de linfocitos de bazo de ratones inmunizados y controles (n=3) por tinción con éster de succinimidil-carboxifluoresceína (CFSE) y posterior análisis por citometría de flujo. El análisis estadístico empleado en todos los casos fue un t test de Student. Resultados: se observó una significativa respuesta humoral en materia fecal hasta los 63 dp3i (DO492 dilución 1/8 ratones controles vs inmunizados: IgA anti-FH7= 0.009±0.078 vs 0.180±0.107, *p