ROLE OF MULTIDRUG RESISTANCE PROTEIN 4 (MRP4) AND THE MECHANISMS INVOLVED IN THE REGULATION OF ITS ACTIVITY DURING MOUSE SPERM CAPACITATION

BUFFONE, MARIANO; ALONSO, CARLOS AGUSTÍN ISIDRO; DAVIO, CARLOS; LOTTERO LECONTE, RAQUEL; PEREZ-MARTINEZ, SILVINA; LUQUE, GUILLERMINA MARÍA

Buenos Aires

Congreso; Reunión Conjunta de Sociedades de Biociencias; 2017

ROLE OF MULTIDRUG RESISTANCE PROTEIN 4 (MRP4) AND THE MECHANISMS INVOLVED IN THE REGULATION OF ITS ACTIVITY DURING MOUSE SPERM CAPACITATIONIn mammals, sperm capacitation correlates with HCO3- influx, activation of soluble adenylyl cyclase (sAC), cAMP increase, PKA activation (pPKA), and increase in tyrosine phosphorylation (pY). cAMP levels are mainly regulated by its synthesis and degradation, but its extrusion through multidrug resistance protein 4 (MRP4) transporter is also involved in this modulation. Previously, we found that cAMP efflux by MRP4 is critical for pY occurrence in mouse SPZ. Moreover, our results indicated that ∼50% of SPZ that undergo capacitation, lose MRP4. Here, we aim to deepen into the role of MRP4 during sperm capacitation. En mamíferos, la capacitación espermática correlaciona, entre otros eventos, con el flujo de iones como bicarbonato y Ca2+, activación de la sAC, incremento en los niveles de AMPc, aumento en la actividad de PKA, y el subsecuente aumento de la fosforilación en tirosina. Tradicionalmente, los niveles de AMPc están regulados a partir de la modulación de su síntesis y su degradación. Sin embargo, en otros tejidos y tipos celulares, la exclusión de este nucleótido al espacio extracelular también participa en la regulación de sus niveles. El principal encargado de esta tarea es el transportador MRP4, miembro de la familia de proteínas de resistencia a multidroga (MRP). Este transportador cumple un rol dual en la fisiología celular, no solo modulando los niveles intracelulares de AMPc, sino además proveyendo de este nucleótido al espacio extracelular donde puede ser metabolizado y disparar eventos de señalización mediante su unión a receptores acoplados a proteína G. Previamente hemos descripto la presencia de este transportador, caracterizado su función y determinado su importancia en el proceso de capacitación en espermatozoides bovinos criopreservados. En la actualidad, nos encontramos realizando la caracterización de MRP4 en espermatozoides murinos epididimales. Los resultados obtenidos hasta el momento indican que este transportador está presente y es funcional en este tipo celular. Para determinar su implicancia en el proceso de capacitación, se incubó a los espermatozoides en medio capacitante en presencia o ausencia del inhibidor específico MK571 (50 uM), se tomaron alícuotas a diferentes tiempos y se determinaron los niveles de pPKA y pY por western blot. Mientras que los niveles de pPKA fueron mayores en espermatozoides incubados con el inhibidor a tiempos iniciales (1 min), menores niveles de pPKA y pY fueron detectados al final de la capacitación (90 min) en estas muestras, sugiriendo que MRP4 sería capaz de modular estos eventos, y su función sería necesaria para su correcta adquisición.Para verificar esto, ensayos de fecundación in vitro fueron realizados, en presencia y ausencia del inhibidor To support the involvement of MRP4 in capacitation, we performed in vitro fertilization (IVF) assays, incubating SPZ in capacitating conditions (CC) in the presence or not of MK571 (MK), a specific MRP4 inhibitor. Results showed a decrease in the % of IVF when SPZ were incubated with MK (p