Utilización de cultivos primarios de células progenitoras neurales murinas bajo la forma de neuroesferas para estudiar el potencial efecto de drogas o compuestos químicos sobre la proliferación celular.

Se emplean cultivos primarios de células progenitoras neurales derivados del sistema nervioso central de ratones de 2 a 4 días de edad. Las células se amplifican en este sistema in vitro formando agregados celulares denominados neuroesferas. El tamaño de las neuroesferas es directamente proporcional a la cantidad de células que las conforman. El agregado de sustancias al medio de cultivo puede modificar la tasa de proliferación de las células y, consecuentemente, el tamaño de las neuroesferas.

Ciencias Médicas

BIOLOGIA-CELULAR Y MOLECULAR

Salud humana

Servicios relacionados con la salud humana n.c.p.

progenitor
neuroesfera
neural
proliferación

Este servicio tiene como destinatarios: Universidades e Institutos de Investigación Nacionales o Extranjeros; Laboratorios de desarrollo de medicamentos (compuestos orgánicos, biopolímeros y proteínas recombinantes) nacionales y extranjeros; Entes de Regulación Nacionales/Mercosur (ANMAT, SENASA, etc.).

Actualmente estamos en condiciones de realizar: - Análisis espectroscópico: absorción ultravioleta, fluorescencia y dicroísmo circular. - Análisis estructural y de estabilidad proteica. - Concentración (speed-vac) y liofilización. - Técnicas de exclusión molecular y medidas de dispersión luminosa (estática y dinámica) para determinar parámetros geométricos y químicos (tamaño, forma y peso) de polipéptidos y otros polímeros. - Asesoramiento sobre problemas de expresión recombinante de proteínas en procariotes y eucariotes.

Bioquímica y Biología Molecular

BIOLOGIA-BIOFISICA

Salud humana

absorción ultravioleta
fluorescencia
dicroísmo circular
estabilidad proteica
proteínas recombinantes

Control calidad de proteínas recombinantes o trasngénicas

Comparación cualitativa de los perfiles obtenidos en HPLC-UV o HPLC-MS, luego de una digestión de la proteína en estudio y un standard de referencia, con la proteasa indicada.

HPLC Shimadzu LC-20AB

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

Servicios relacionados con la salud humana n.c.p.

Mapeo
peptídico

Control de calidad de proteínas recombinantes, caracterización de nuevas proteínas, sitios de proteólisis, caracterización de péptidos con actividad biológica.

Espectrometría de masa, ESI-IT y/o MALDI-TOF-TOF.

Maldi-Tof Tof AB Sciex 4800 TOF TOF PLUS

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

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péptidos
proteínas
lipidos
compuestos quimicos

Identificación de proteínas descriptas y de novo sequencing.

Digestión en solución o "in gel" y posterior análisis mediante PMF (MALDI) y MS/MS (MALDI, LCQ).

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

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MS
proteínas

Preparación de las muestras para su posterior análisis en el secuenciador de aminoácidos y en los espectrómetros de masa.

Cromatografía en fase reversa.

Secuenciador de Aminoacidos Shimadzu PPSQ31A Protein Sequence | Maldi-Tof Tof AB Sciex 4800 TOF TOF PLUS | HPLC Shimadzu LC-20AB

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

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proteicas
análisis

Control de calidad de proteínas recombinantes, identificación de proteínas descriptas en bases de datos, ubicación de sitios de proteólisis, control de heterogeneidades, caracterización de nuevas proteínas.

Degradación de EDMAN. Se marca el grupo amino terminal del polipéptido y luego se escinde. El aminoácido derivado se extrae y previa modificación se identifica por tiempo de retención mediante cromatografía líquida a alta presión (HPLC) en fase reversa y detección al UV (269 nm). Por repetición del ciclo de degradación se obtiene la secuencia polipeptídica.

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

Servicios relacionados con la salud humana n.c.p.

péptidos
proteínas

Preparación de las muestras para su posterior análisis en el secuenciador de aminoácidos y en los espectrómetros de masa.

Secuencia de aminoacidos amino y carboxilo terminal, con derivatización de residuos de cisteína

Secuenciador de Aminoacidos Shimadzu PPSQ31A Protein Sequence | HPLC Shimadzu LC-20AB

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

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C_terminal
peptídico
amino terminal
aminoacidos

Control de calidad para proteínas recombinantes provenientes de la industria farmacéutica.

Degradación de EDMAN. Se marca el grupo amino terminal del péptido C-Terminal del polipéptido y luego se escinde. El aminoácido derivado se extrae y previa modificación se identifica por tiempo de retención mediante cromatografía líquida a alta presión (HPLC) en fase reversa y detección al UV (269 nm). Por repetición del ciclo de degradación se obtiene la secuencia polipeptídica.

Cromatografo liquido Shimadzu Prominence

Ciencias Médicas

MEDICINA

Salud humana

Servicios relacionados con la salud humana n.c.p.

péptidos
secuenciacición

El servicio se aplica al control del proceso de producción, liberación y estabilidad de un producto medicinal biológico por medio de la determinación del porcentaje de sus formas PEGiladas por CE.

Este método es usado para cuantificar el número y tamaño de moléculas de polietilenglicol (PEG) unidas a la proteína B2036. El PEG puede unirse a nueve sitios principales sobre la proteína B2036. Las formas pegiladas predominantes son PEG4, PEG5 Y PEG6. Mediante CE, las formas pegiladas son separadas por su carga y tamaño. Al pH de 1,9 a 2,2 que se utiliza en el método, la diferencia en carga depende solamente del número de residuos lisina que tengan cadenas de PEG unidas. Cada cadena de PEG unida elimina una carga positiva de la molécula de proteína. El número de cadenas de PEG unidas también determina el tamaño de la molécula. De este modo, las formas poco pegiladas son más chicas y tienen más carga positiva, y por lo tanto migran más rápido. En CE, las sustancias migran frente al detector a distinta velocidad; los picos que se ven primero corresponden a las sustancias que migran más rápido, etc. Por esta razón para la cuantificación se usa el área corregida de pico ajustada por el tiempo de migración. Los resultados son reportados como porcentaje de área corregida para PEG4, PEG5 y PEG6.

Ciencias Quimicas

QUIMICA-ANALITICA

Salud humana

Ensayos y análisis técnicos

formas pegiladas
electro folesis capilar
biofármacos

El servicio se aplica a la separación y cuantificación de S-adenosilmetionina y S-adenosilhomocisteína en muestras complejas por electroforesis capilar, con el fin de determinar actividad enzimática en las muestras analizadas.

En el laboratorio se reciben muestras de medios de incubación en las que se determina la actividad de una enzima a partir de la cuantificación del sustrato y del producto de la reacción por electroforesis capilar zonal. A tal fin se introduce la muestra en el capilar de separación, previamente acondicionado, seguido de la aplicación de voltaje (entre 20 y 30 kV). Los compuestos son separados por su relación carga/masa. Al aplicar polaridad positiva en el extremo de entrada del capilar migra más rápido aquel que posea mayor relación carga/masa. La detección se realiza por absorbancia UV a 254 nm. Se registran los electroferogramas y se procesan los datos en función del tiempo de migración, el área y la altura de pico de cada compuesto. Para la cuantificación se procede a la calibración con estándares. La cuantificación de ambos compuestos se realiza en forma simultánea.

Ciencias Quimicas

QUIMICA-ANALITICA

Salud humana

Ensayos y análisis técnicos

electroforesis capilar
s-adenosilmetionina
s-adenosilhomocisteína
actividad enzimática

El servicio se aplica a la separación y cuantificación de las isoformas de eritropoyetina por electroforesis capilar presentes en soluciones concentradas. La eritropoyetina es obtenida por tecnología de ADN recombinante. Cada lote del producto final debe ser controlado con diferentes ensayos de acuerdo con la Farmacopea Europea, entre ellos, el que aquí se describe.

En el laboratorio se reciben muestras desaladas de la solución de referencia (CRS) y de las soluciones a ensayar, en una concentración aproximada de 1 mg/ml. La metodología consiste en la separación electroforética mediante electroforesis capilar zonal. Condiciones experimentales: Buffer concentrado: cloruro de sodio 0,1 M, tricina 0,1 M, acetato de sodio 0,1 M. Buffer de corrida: cloruro de sodio 0,01 M, tricina 0,01 M, acetato de sodio 0,01 M, urea 7 M, putrescina 2,5 mM. Ajustar el pH a 5,55, a 30°C, con ácido acético al décimo. Filtrar. Detección: 214 nm. Capilar: sílica fundida, 50 µm d.i. x 107 cm longitud total. Temperatura: 35°C. Temperatura del autosampler: 4°C. Acondicionamiento preliminar: lavado (por presión, 30 psi) con NaOH 0,1 M, 60 min; luego con buffer de corrida, 60 min. Aplicar 20 kV durante 12 hs. Introducción de muestra: por presión (0,7 psi), 25 seg; ajustar según la altura de los picos. Corrida: aplicar 16 kV durante 70 min (la isoforma 8 es detectada en general antes de los 60 min). Acondicionamiento entre corridas: lavado (por presión, 30 psi) con agua, 10 min; con NaOH 0,1 M, 5 min; con buffer de corrida, 10 min. Adecuación del sistema: el electroferograma debe mostrar un perfil de picos correspondientes a los picos que figuran en el electroferograma provisto con el erythropoietin CRS. El pico más alto debe ser al menos 50 veces superior al ruido de la línea de base (ajustar la cantidad de muestra introducida para obtener picos de altura apropiada). La isoforma 1 puede no ser visible. El pico de la isoforma 8 debe detectarse. La resolución entre los picos correspondientes a las isoformas 5 y 6 debe ser igual o mayor a 1. Repetir la separación del CRS al menos 3 veces. La línea de base debe ser estable, pudiendo mostrar una ligera deriva.

Ciencias Quimicas

QUIMICA-ANALITICA

Salud humana

Ensayos y análisis técnicos

electroforesis capilar
eritropoyetina
isoformas
biofármacos

El servicio es la determinación de actividad heparínica en muestras de materia prima, producto intermedio y producto terminado de la industria farmacéutica. El método utilizado es el cinético-enzimático donde se mide la generación de un producto coloreado en tiempo real espectrofotométricamente. A partir de una curva de calibración se compara la inhibición de la actividad enzimática de una serie de patrones contra una curva de distintas concentraciones de la materia prima/producto.

Prestación 1: Se modifican las concentraciones de factores X o II, antitrombina, preincubación y temperatura para obtener un comportamiento lineal de la actividad con el logaritmo de la concentración de heparina. Prestación 2: Con las condiciones optimizadas en la prestación 1 se mide la cantidad de heparina en la muestra realizando una curva de actividad en función de concentración para patrones y muestras.

La metodología es el seguimiento en el tiempo de la aparición de un producto de reacción catalizada por factores de coagulación. Las enzimas son inhibidas por heparina y por lo tanto puede utilizarse para medir la cantidad de heparínica de una muestra. Con los reactivos provistos por la empresa solicitante se prepara el medio de reacción y se deja 10 minutos a 37 ºC en estufa. Este posee los factores de coagulación X o II, antitrombina y la muestra o estandar. La reacción se inicia con el agregado del sustrato cromogénico. La microplaca agita y la reacción se sigue espectrofotométricamente a 37 ºC en el lector, tomando medidas cada cierto tiempo. Se calculan la actividad enzimática determinada por las pendientes de absorbancia en función de tiempo corrobándose la velocidad de reacción se mantenga en condiciones iniciales. A mayor heparina menor la actividad enzimática de la preparación. Se estudia la dependencia lineal de la actividad con el logaritmo de la concentración de heparina declarada. Se toman los parámetros exigidos en farmacopeas estadounidense y francesa donde se solicitan requerimentos en cuanto los coeficientes de regresión obtenidos y relación entre las pendientes de patrón y muestra.

Bioquímica y Biología Molecular

QUIMICA-FARMACEUTICA

Tecnologia sanitaria y curativa

Ensayos y análisis técnicos | Servicios de prácticas de diagnóstico y tratamiento; servicios integrados de consulta, diagnóstico y tratamiento

control de calidad
ensayo enzimático
actividad enzimática
productos biotecnológicos

Se evaluarán las distintas poblaciones celulares presentes en la muestra biológica recibida reconociendo marcadores específicos de cada tipo celular mediante la técnica de citometría de flujo. Se utilizarán anticuerpos primarios específicos para detectar los marcadores característicos de las distintas poblaciones celulares incluidas en la muestra.

Se utilizarán anticuerpos primarios marcados con fluoróforos que permitan identificar el marcador característico de ese tipo celular por citometría de flujo.

Ciencias Médicas

BIOLOGIA-BIOQUIMICA

Salud humana

Ensayos y análisis técnicos

células multipotentes
médula ósea
células mononucleares
células mesenquimales

Brindar conocimientos sobre los fundamentos y aplicaciones prácticas de la electroforesis capilar.

Teoría general y principios de la electroforesis capilar (CE). Flujo electroosmótico: características y control. Movilidad, tiempo de migración. Dispersión de banda, eficiencia, resolución. Instrumentación y aspectos operacionales de la CE. Introducción de muestra, capilares, control de temperatura, detección. Métodos de preconcentración de analitos. Modos de separación: electroforesis capilar zonal (CZE), cromatografía micelar electrocinética (MECK) electrocromatografía capilar (CEC), isoelectroenfoque capilar (CIEF), isotacoforesis capilar (CITP), electroforesis capilar en gel (CGE). Optimización de las condiciones de separación y detección: desde moléculas de bajo peso molecular hasta biomoléculas. Aplicaciones.

Ciencias Médicas

QUIMICA-ANALITICA

Salud humana

Actividades profesionales, científicas y técnicas n.c.p.

electroforesis capilar
biomoleculas
capacitación

Las actividades del presente servicio están orientadas a las mediciones de TEER, una herramienta experimental útil y objetiva, para definir y caracterizar un tejido funcional in vitro, evaluar la confluencia celular y estudiar los procesos de permeabilidad e integridad de dichas membranas celulares. Los destinatarios de este servicio son grupos de investigación en las áreas mencionadas y la industria farmacéutica para la evaluación de fármacos en sistemas in vitro.

LPD-TEER está constituido por un módulo de control y adquisición y un cabezal con sistema de cuatro electrodos que se sumerge en la cámara donde crecen las células: una de las partes se encuentra expuesta a la superficie apical y la otra hacia el lado basal de las células. Cuando las células crecen sobre una membrana semipermeable en la cámara y se alcanza el 100% de la confluencia, se observa un cambio significativo en los valores de resistencia eléctrica en comparación con el valor basal (a tiempo cero). Las mediciones se realizan mediante la aplicación de una señal de corriente alterna (AC) a través de los electrodos colocados a ambos lados de la monocapa celular, a una determinada frecuencia, y se mide la corriente y el voltaje que circula a través de dicha capa celular. Luego, se determina la resistencia de este sistema y se normaliza por un factor de corrección que tiene en cuenta el área total, el tamaño y la densidad de poros (especificado por el fabricante de las membranas). De esta manera, TEER refleja la conductancia iónica de la vía paracelular en la monocapa epitelial, el flujo de agua, así como el tamaño de los poros de las uniones estrechas (a bajas frecuencias). Las ventajas y el amplio uso del método TEER se basan en que se trata de una metodología rápida, de bajo costo, no invasiva y aplicable al monitoreo de células vivas durante sus diversas etapas de crecimiento y diferenciación. La simplicidad de los experimentos que involucran la medición de TEER y la capacidad de correlacionar los resultados de TEER con otros experimentos de transporte hacen que el uso de esta técnica sea una herramienta experimental útil para comprender la fisiología de células endoteliales y/o epiteliales. Al solicitante del presente STAN se le entregará el correspondiente informe de los resultados obtenidos, el cual no reviste carácter de certificación; no se emitirán recomendaciones ni observaciones extras a dicho informe.

Ciencias Quimicas

QUIMICA-ANALITICA

Quimica

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias exactas y naturales n.c.p.

TEER
PERMEABILIDAD DE MEMBRANAS
CONFLUENCIA CELULAR
TEJIDOS CELULARES
INDUSTRIA FARMACEUTICA

El servicio consiste en la medición de arsénico en muestras acuosas mediante una metodología analítica desarrollada en el laboratorio (KIT LPD-As).La misma involucra una técnica electroquímica y electrodos descartables (dispositivo específicamente diseñado). Parámetros analíticos:LOD: 50ppb As,LOQ: 100ppb As,rango lineal: 100-1000ppb As. Los destinatarios del servicio son personas y entidades, del ámbito público o privado, que requieran determinar el contenido de arsénico en muestras de agua.

KIT LPD-As esta constituido por un potenciostato para la aplicación de la técnica electroquímica y registro de la medición y procesamiento de la información junto con un sensor constituido por electrodos descartables de fabricación nacional (elaborados en el laboratorio). La muestra se recibe y se acidifica convenientemente con acido clorhídrico de manera de ajustar a un pH=1,00. Se coloca una alícuota de 50 microlitros de muestra sobre el sensor y se procede a la aplicación de la técnica. Se realiza la corrección de la lectura de la muestra respecto de la solución blanco y se informa el contenido de arsénico total respecto de un estándar de As, a 21ºC. En el caso de que la muestra suponga un contenido de As superior al valor máximo cuantificable dentro del rango lineal de la metodología, se procederá a diluir la misma con solución de HCl 0,1 M. Al solicitante del presente STAN se le entregará el informe correspondiente a los resultados obtenidos, el cual no reviste carácter de certificación; no se emitirán recomendaciones ni observaciones extras a dicho informe.

Ciencias Quimicas

QUIMICA-ANALITICA

Quimica

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias exactas y naturales n.c.p. | Descontaminación y otros servicios de gestión de residuos

CUANTIFICACIÓN DE ARSENICO
SENSOR
ELECTROQUIMICA
AGUAS

Radioinmuensayo para la cuantificación de diferentes hormonas

Servicio que permite la cuantificación de homonas endógenas.

Radioinmunoensayo. Se utiliza un analito marcado radioactivamente (que es del mismo tipo que el que se va a determinar, por ejemplo, si se quiere determinar insulina se usa insulina marcada radioactivamente). Se evalúa la unión del analito marcado al anticuerpo específico en presencia de concentraciones crecientes del analito sin marca (curva standard), de modo tal que la marca radioactiva que corresponde a la unión del analito marcado a su anticuerpo va disminuyendo a medida que aumenta la cantidad del analito no marcado debido a que este último compite con el marcado para unirse al anticuerpo. En paralelo se evalúa el porcentaje de unión del analito de la muestra incógnita al anticuerpo. A través de la curva standard se estima la cantidad de analito presente en la muestra problema. Se entrega un informe de resultados. Se deja constacia que El CONICET no certifica los resultados del ensayo.

Bioquímica y Biología Molecular

QUIMICA-BIOLOGICA

Prom.Gral.del Conoc.-Cs.Medicas

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

radioinmunoensayo
péptidos
angiotensina
insulina