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El propósito de este trabajo fue obtener información estructural sobre los cambios conformacionales de la bomba de Calcio de Membrana Plasmática (PMCA) producidos por la unión de Ca2+, calmodulina y fosfolípidos ácidos. Hemos demostrado [1] que los cambios conformacionales en la región citoplasmática son acompañados por cambios en la región transmembrana de la enzima. La incorporación específica de [125I]TID-PC/16, un análogo de fosfatidilcolina fotoactivable, permite estudiar la interfase lípido-proteína [2] y nos permitió demostrar la existencia de una conformación inhibida en presencia de Ca2+ (E1I) y una conformación activada (E1A) en presencia de Ca2+ y calmodulina o tratamientos que simulan los efectos de calmodulina [1]. En este trabajo utilizando esta sonda, determinamos las constantes de disociación (kD) para Ca2+, calmodulina, ácido fosfatídico y ácido oleico. Por otra parte, la proteólisis parcial de PMCA con proteasa V8, permitió identificar las regiones transmembrana que sufren cambios conformacionales. Nuestros resultados indican que: (a) La modulación de la enzima es ejercida a través del dominio C-Terminal, que induce una conformación auto-inhibida aparente para el transporte pero no modifica la afinidad por Ca2+ del dominio transmembrana. (b) La unión de calmodulina provoca una menor incorporación específica de [125I]TID-PC/16 en la región C-Terminal (TM 5-10) y Central (TM 3-4) mientras que en la activación por ácido fosfatídico, se observan cambios en la región Central (TM 3-4) y N-Terminal (TM 1-2) de la proteína, sugiriendo que estos moduladores presentan un mecanismo diferente de activación. En conclusión mostramos que la activación por fosfolípidos ácidos o calmodulina se produce por modificación de distintas zonas citoplasmáticas lo que indicaría la existencia de más de una conformación activada (E1A) y que la unión de Ca2+ en el equilibrio no se modifica por la presencia de los activadores, aunque disminuya la constante de afinidad aparente determinada por la actividad ATPasa [3]. Con subsidios ANPCYT, CONICET, UBACYT y NIH.