IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La helicasa NS3 del virus del dengue cataliza en un mismo sitio la hidrólisis de los nucleótidos ATP, GTP, CTP y UTP
Autor/es:
JJ INCICCO; RM GONZÁLEZ-LEBRERO; LG GEBHARD; AV GAMARNIK; SB. KAUFMAN
Lugar:
Los cocos, Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; XXXVIII reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica (SAB)
Resumen:
<!--
/* Style Definitions */
p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal
{mso-style-parent:"";
margin:0cm;
margin-bottom:.0001pt;
mso-pagination:widow-orphan;
font-size:12.0pt;
font-family:"Times New Roman";
mso-fareast-font-family:"Times New Roman";}
@page Section1
{size:612.0pt 792.0pt;
margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm;
mso-header-margin:36.0pt;
mso-footer-margin:36.0pt;
mso-paper-source:0;}
div.Section1
{page:Section1;}
-->
El genoma del virus del dengue codifica una poliproteína que
es clivada por peptidasas para dar tres proteínas estructurales y siete
proteínas no estructurales. Entre estas últimas la denominada NS3 presenta las
características distintivas de las helicasas y posee actividades enzimáticas
que resultan esenciales para la replicación del virus [1-3]. Las helicasas,
como la proteína NS3, realizan el trabajo mecánico de separar los pares de
bases de dos cadenas complementarias de ARN o ADN, acoplando para ello la
energía libre de hidrólisis de nucleósidos trifosfato (NTPs). Se sabe que la NS3 del virus del dengue
cataliza la hidrólisis de diversos NTPs y que esta actividad se ve incrementada
por la presencia ARN tanto de simple como de doble cadena. En trabajos previos
hemos estudiado la especificidad [considerada según la magnitud del parámetro
(kcat/KM)] de la NS3
por los nucleótidos ATP, GTP, CTP y UTP en ausencia de ARN [4]. En este trabajo
nos proponemos establecer si la hidrólisis de los cuatro sustratos mencionados
se produce en el mismo sitio catalítico de la proteína. Para responder este
interrogante establecimos un criterio experimental de aplicación que sustituye
con ventajas las usuales curvas de desplazamiento empleadas en casos
análogos.
Las determinaciones de actividad NTPasa se efectuaron a 25ºC cuantificando el fosfato
liberado en medios de reacción conteniendo: MOPS/KOH (pH 6.5) 25mM, KCl 100mM,
EDTA 0.5mM, Mg2+ libre 1.5mM y glicerol 3%. Dado que el procedimiento
experimental adoptado exigió contar con las curvas de sustrato de cada
nucleótido, en la práctica significó obtener nuevamente la serie de parámetros
(kcat/KM). En esta oportunidad, se llegó a una nueva secuencia de
especificidad: GTP >ATP >CTP >UTP que, en principio, rectifican los
resultados anteriormente informados. La segunda serie de resultados
experimentales reveló que la hidrólisis de los nucleótidos ATP, GTP, CTP y UTP
se produce en un mismo sitio catalítico de la NS3. Con subsidio UBACyT.