Estudio metabolómico de carcinoma celular renal de células claras en modelos in vitro

MARÍA ELENA KNOTT; LYDIA INÉS PURICELLI; MARIO O. SALAZAR; MALENA MANZI; MARÍA EUGENIA MONGE

Rosario

Congreso; III Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2016

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

El Carcinoma Celular Renal de células claras (CCRcc) es el tipo histológico más frecuente de carcinoma renal. Este tipo de cáncer se ha asociado con la pérdida de funcionalidad del gen supresor tumoral von Hippel-Lindau (VHL),1 que lleva a un aumento en la expresión del Factor Inducible por Hipoxia 1α (HIF1α), incluso en condiciones de normoxia. Como consecuencia, se desencadena una sobreexpresión de genes relacionados con la glucólisis aeróbica. Recientemente, se han descripto alteraciones metabólicas asociadas al CCR durante la progresión tumoral y la metástasis.2,3 Con el objetivo de estudiar los perfiles metabólicos de células CCRcc, se empleó un modelo in vitro de 2 líneas celulares de diferente background genético [786-O (VHL-/-) y Caki-1 (VHL+/+)] y se compararon con el de la línea no tumoral HEK 293. Mediante un estudio metabolómico no dirigido se analizaron los medios condicionados (MC) de cada sistema mediante la técnica de cromatografía líquida de ultra performance acoplada a espectrometría de masas de alta resolución, utilizando un espectrómetro de masas con analizador de cuadrupolo-tiempo de vuelo. Los MC se obtuvieron por incubación de monocapas de las distintas líneas celulares con el medio de cultivo apropiado durante 12 horas y sin suero. Se analizaron 22 réplicas para cada línea celular y, en paralelo, como controles, los medios de cultivo correspondientes. Los extractos fueron obtenidos por tratamiento de los MC con isopropanol, centrifugación y posterior liofilización del sobrenadante. Las muestras se analizaron por cromatografía en fase reversa utilizando una columna C18. Los espectros de masas fueron adquiridos en el rango de m/z 50-1200 mediante ionización por electrospray en modo negativo. La matriz de variables metabólicas (pares tr-m/z) fue obtenida con el programa Progenesis QI y procesada con el método estadístico no supervisado de análisis de componentes principales, mediante el cual se identificaron 3 poblaciones asociadas a cada uno de los tipos celulares estudiados. Actualmente, se están analizando los datos mediante métodos de clasificación supervisados a fin de determinar un panel de variables discriminantes que permita diferenciar el exometaboloma celular en las líneas estudiadas. La identificación de estas variables permitirá generar un mayor conocimiento sobre la biología del CCRcc y sobre las vías metabólicas y los procesos bioquímicos alterados en la enfermedad.