CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

dreich es una enfermedad poco frecuente, cuya incidencia es de 1/50.000 nacidos vivos. Se trata de la ataxia autosómica recesiva de mayor prevalencia mundial, y su causa es la mutación de ambos alelos codificantes para una proteína de localización eminentemente mitocondrial, denominada frataxina, cuya función está relacionada con el ensamblado de los centros de hierro-azufre en otras proteínas mitocondriales. Las mutaciones más frecuentes (95-96% de los individuos con Ataxia de Friedreich) para los alelos mencionados, son las expansiones de un triplete GAA localizado en el primer intrón, y el resultado es una disminución de la transcripción de la secuencia, con la consecuente reducción en los niveles de frataxina. El número de expansiones varía notablemente, desde algunas decenas hasta miles. El 4-5% restante de los pacientes son heterocigotas compuestos, que poseen una expansión en un alelo, combinada con alguna mutación puntual en el otro. Las mutaciones puntuales son variadas, y poseen diferentes efectos según su posición, algunas de ellas posiblemente también conduciendo a menores niveles de la proteína madura. En relación con el tratamiento, una de las perspectivas más promisorias parece ser la promoción del incremento de los niveles de frataxina, ya sea aumentando su tasa de transcripción, impidiendo su degradación, o directamente administrándola como una proteína exógena. En consecuencia, la medición de frataxina en muestras biológicas se convierte en una necesidad diagnóstica, pero también en una herramienta de monitoreo de las terapias futuras.Materiales y métodos: la detección de la molécula se realizó mediante un ELISA competitivo en fase heterogénea, utilizando un suero de conejo anti frataxina humana. La competencia ocurrió entre la frataxina en solución (estándares de frataxina recombinante, o frataxina en la muestra en estudio) y la frataxina en fase sólida (frataxina recombinante adherida a las placas multiwell de poliestireno). Los anticuerpos anti-frataxina libres se unieron a la placa, y fueron luego detectados utilizando un conjugado anti-conejo unido a peroxidasa, y su presencia revelada empleando TMB como mezcla de sustrato/cromógeno. Tanto la frataxina recombinante como el suero de conejo fueron producidos en nuestro laboratorio. Las muestras de sangre se tomaron por punción venosa en presencia de anticoagulante (heparina sódica), en adecuadas condiciones de asepcia. Las proteínas totales fueron extraídas empleando buffer Tris con PMSF, EDTA y NP-40, y mantenidas luego a -70ºC hasta su uso. El contenido total de proteína fue determinado empleando el método del ácido bicinconínico, y las muestras procesadas por ELISA. Los resultados se expresaron en términos de masa de frataxina relativizada a las proteínas totales. Los pacientes firmaron un consentimiento por escrito, y el protocolo fue avalado por el Comité de Ética de FLENI y de la Facultad de Farmacia y Bioquímica (UBA). Resultados: El ensayo descripto se realizó en 20 individuos sin signos clínicos de Ataxia de Friedreich, y en 33 individuos con esos signos, y diagnóstico genético confirmatorio. Los resultados se muestran en la figura, y permiten afirmar que el ensayo tiene buena capacidad para discriminar entre unos y otros, y resulta una herramienta útil en el diagnóstico complementario (por su bajo costo) y en el eventual seguimiento de terapias futuras.Conclusiones: Este desarrollo constituye una herramienta crucial para el diagnóstico complementario y para el eventual seguimiento de las terapias futuras de Ataxia de Friedreich, por su sencillez, bajo costo y rapidez de análisis.