Participación de integrinas en el efecto pro-adhesivo de la Galectina-1 sobre células de carcinoma hepatocelular

CARABIAS, PABLO; MANZI, MALENA; ELOLA, MARÍA T.; RABINOVICH, GABRIEL A.; WOLFENSTEIN-TODEL, CARLOTA; TRONCOSO, MARÍA F

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

  La galectina-1 (Gal-1) está involucrada en procesos de homeostasis, adhesión, migración y diferenciación celular, así como también en la transformación maligna y regulación de respuesta inmune. Con el objetivo de investigar su rol como modulador de la adhesión de hepatocitos utilizamos como modelo la línea de carcinoma hepatocelular, HepG2 C3A. Previamente demostramos que la galectina-1 recombinante (rGal-1) promueve la adhesión de estas células. Mediante la tinción con Cristal Violeta se observa un efecto máximo (156±5%) comparado con las células control (100%) luego de 1 h de incubación con la rGal-1 soluble (14 µM). La pre-incubación con lactosa previene este efecto, sugiriendo la participación del dominio de reconocimiento de carbohidratos. Para investigar el posible papel de la Gal-1 como un componente de la matriz extracelular, se inmovilizó la rGal-1 (10 µg/pocillo) y se evaluó la adhesión celular, observándose un aumento significativo (138±9%, 1h de incubación) con respecto a los pocillos sin recubrir. Para evaluar el efecto de la sobre-expresión de la Gal-1, las células HepG2 se transfectaron con el plásmido pcDNA3.1-Lgals1. En estas células con alta expresión de Gal-1 la adhesión fue significativamente mayor (169±23%) que la de las células sin transfectar. Con el fin de evaluar el papel de las integrinas, las células se pre-incubaron con anticuerpos (bloqueantes) contra distintas subunidades de integrinas. Se observó una disminución del efecto producido por la rGal-1: Ac anti a1 (83,17±0.31%), anti a3 (70,77±2,53%), anti aV (84,13±2,84%) y anti b1 (83,06±1,22%). Las células se pre-incubaron con wortmanina (1µM), un inhibidor de la PI3K, obteniéndose una disminución significativa del efecto producido por la rGal-1 (133±5% vs 156±5%). Estos resultados demuestran que la Gal-1 promueve la adhesión de las células HepG2, efecto en el que participan las subunidades a1, a3, aV y b1 de las integrinas, sugiriendo la activación de, por lo menos, la vía de la PI3K.