En la búsqueda de determinantes estructurales del plegado de un péptido intrínsecamente desordenado.

PABLO ROSI; ERNESTO A. ROMAN; F. LUIS GONZÁLEZ-FLECHA; JOSÉ MARÍA DELFINO; JAVIER SANTOS

La Plata, Buenos Aires

Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008

Sociedad Argentina de Biofísica

<!-- @page { size: 21cm 29.7cm; margin: 2cm } P { margin-bottom: 0.21cm } A:link { color: #0000ff } --> En la búsqueda de determinantes estructurales del plegado de un péptido intrínsecamente desordenado Pablo Rosia*, Ernesto Romana*, Luis González Flechaa, José María Delfinoa, y Javier Santosa y b e-mail: rosip@qb.ffyb.uba.ar * Estos autores contribuyeron por igual a este trabajo. a Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas. Junín 956, C1113AAD, Ciudad de Buenos Aires, Argentina. b Universdad Nacional de Quilmes. Roque Sáenz Peña 352, B1876BXD, Bernal , Provincia de Buenos Aires, Argentina La tiorredoxina de E. coli (TRX) es una proteína pequeña de 108 residuos muy estable y con una topología compleja. Históricamente ha sido utilizada como modelo para el estudio de la estabilidad y el plegado. En nuestro laboratorio se ha determinado que la hélice C–terminal (péptido 94-108, LSKGQLKEFLDANLA) tiene un papel central en la consolidación de la estructura final de la TRX. Estudios de dicroísmo circular (CD) del péptido 94-108 en solución acuosa (fosfato de sodio 2 mM, pH 7.0) mostraron un espectro compatible con la ausencia de estructura secundaria. La adición tanto de trifluoroetanol (TFE, 20 % v/v) como dodecilsulfato sódico (SDS, 2.0-5.0 mM), indujo bandas dicroicas compatibles con la estabilización de estructura -helicoidal. En este trabajo nos preguntamos qué características de la secuencia del péptido 94-108 contribuyen con la estabilidad de su estructura secundaria. Para esto se utilizó SDS como inductor de estructura y se prepararon mutantes puntuales del péptido 94-108 en las que fue reemplazado cada residuo de leucina por alanina: L94A, L99A, L103A y L107A. El análisis de la elipticidad a 220 nm en función de concentraciones submicelares de SDS (0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 y 5.0 mM) mostró que todas las variantes presentan una estabilización de estructura helicoidal en concentraciones de SDS entre 3 y 5 mM. Sin embargo, el punto medio de la transición conformacional para las variantes L94A y L107A se encuentra desplazado a concentraciones menores de SDS comparado con las observadas para las variantes L99A y L103A. Todas las transiciones conformacionales observadas fueron reversibles alcanzando el equilibrio durante el mezclado. Experimentos de electroforesis capilar en presencia del SDS demostraron que este detergente se une a los péptidos, y que en consecuencia, el cambio conformacional podría estar mediado por la interacción directa del SDS con el péptido. Los tiempos de retención para cada péptido fueron significativamente distintos. En conjunto, estos resultados sugieren que cada péptido podría estar uniendo cantidades distintas de SDS, así como también que la tendencia a formar estructura helicoidal podría estar determinada por la estequiometría de unión. Agradecimientos: Dra. Nora Vizioli y Dr. Mariano González Lebrero. ANPCyT, CONICET, UNQ, FFyB, UBA.