IQUIFIB   02644
INSTITUTO DE QUIMICA Y FISICOQUIMICA BIOLOGICAS "PROF. ALEJANDRO C. PALADINI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de un sistema de proteínas de membrana reconstituidas en micelas mixtas por Espectroscopia de Correlación de Fluorescencia (FCS)
Autor/es:
MARTÍN DODES TRAIAN; F. LUIS GONZÁLEZ-FLECHA; VALERIA LEVI
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
Your Favorite Abstract Title
<!--
@page { size: 21.59cm 27.94cm; margin: 2cm }
P { margin-bottom: 0.21cm }
-->
Las preparaciones de proteínas de membrana se
solubilizan y estabilizan utilizando sistemas de lípidos y
detergentes, de modo tal de proveer de un entorno a las mismas que
les permite conservar características estructurales
fundamentales para su estudio.
La bomba de calcio de la membrana
plasmática (PMCA) es una ATPasa transportadora de Ca2+
presente en la membrana celular de todos los eucariotas. Una
preparación de membranas de eritrocitos humanos se hizo
reaccionar con isotiocianato de fluoresceína (FITC) en
condiciones tales que se marca la lisina 591 de la isoforma 4b de la
PMCA. La PMCA-FITC fue solubilizada de estas membranas y purificada
por cromatografía de afinidad en columnas de
agarosa-calmodulina. La proteína fue reconstituida en micelas
mixtas conteniendo 140 µM de asolectina y 800 µM del
detergente C12E10. El sistema micelar
resultante fue estudiado por espectroscopia de correlación de
fluorescencia (FCS). Esta técnica, mediante el análisis
de una función de autocorrelación, permite estimar el
coeficiente de difusión de las partículas
fluorescentes, que en este caso fue de 24 µm2 .
seg-1. Por otra parte se caracterizó el mismo
sistema micelar en ausencia de proteínas utilizando
fosfatidiletanolamina marcada en su cabeza polar con Rhodamina-X
(PE-Rho). El coeficiente de difusión obtenido en estas
condiciones fue de aproximadamente 30 µm2 . seg-1.
Estos resultados estarían asociados a partículas
de un radio hidrodinámico de 7 nm para las micelas mixtas de
lípido y detergente, que se incrementa a 9 nm para las micelas
que contienen la PMCA.